紅江橙黃龍病Nested-PCR檢測及其內生可培養(yǎng)細菌研究.pdf

1、本文對紅江橙黃龍病的快速檢測方法、紅江橙苗木繁育基地與果園黃龍病帶菌率及紅江橙內生可培養(yǎng)細菌種群數(shù)量與種類差異等進行了研究。獲得如下主要結果:
　　1.紅江橙黃龍病檢測方法的篩選:選取已報道的柑橘黃龍病特異性引物,分別用rTaq DNA聚合酶和Mighty Amp DNA聚合酶常規(guī)PCR以及Nested-PCR對紅江橙黃龍病進行了檢測,結果發(fā)現(xiàn),在rTaq DNA聚合酶反應體系下常規(guī)PCR的檢測結果的重復性、特異性、準確性等均不穩(wěn)

2、定;而在Mighty Amp DNA聚合酶反應體系下,以CQULA03F/CQULA03R為引物的常規(guī)PCR以及Nested-PCR擴增的目的片段,其條帶亮度較高、重復性較好、特異性也較強,表明該2種方法均可作為紅江橙黃龍病的快速檢測方法;其中Nested-PCR方法對反應體系中組分及酶的要求不高,穩(wěn)定性好,且檢測成本低,適宜大批次樣本檢測,為此,本文田間調查選用了Nested-PCR方法檢測。
　　2.用Nested-PCR法,

3、對已顯黃龍病癥狀的紅江橙植株葉片、根、莖、果皮、果實等組織部位檢測結果顯示,各部位均可檢測到特異條帶,說明上述組織中均可攜帶黃龍病菌;進一步對表現(xiàn)為斑駁狀、均勻黃花狀、窄且無光澤狀及花葉狀葉片檢測發(fā)現(xiàn),其中以斑駁狀葉片的陽性檢測率達100％。因此,本文認為,表現(xiàn)有斑駁狀葉片的植株可作為紅江橙黃龍病田間診斷依據(jù)。
　　3.本文對3個主要紅江橙苗木繁育基地的嫁接苗、采穗母樹(圃)和砧木苗共92份樣品檢測結果顯示,3個苗圃的嫁接苗、采穗

4、母樹(圃)中均檢測出黃龍病菌特異條帶,其中嫁接苗帶菌率23.9%(10.0%-36.4%),采穗母樹(圃)帶菌率21.2%(14.3%-25.0%),并從1個苗圃的砧木苗中檢測出黃龍病菌特異條帶。由此可見,紅江橙苗木帶菌率較高,可能是田間病原的主要來源之一。
　　4.對廉江青平鎮(zhèn)和紅江農場共15個種植園461份樣品檢測結果表明,青平鎮(zhèn)果園黃龍病帶菌率為11.11%-28.89%,紅江農場果園黃龍病帶菌率為25.93%-30.76%

5、;檢測還發(fā)現(xiàn),果園種植年限與黃龍病帶菌率呈正相關,果園年限越長其果樹帶菌率越高,7年以上橙園黃龍病帶菌率均達20%以上。
　　5.用組織分離法,對經(jīng)Nested-PCR檢測后帶菌與不帶菌紅江橙樣本根莖葉部位進行內生可培養(yǎng)細菌分離,結果表明不帶菌材料根莖葉部位內生菌數(shù)量均高于帶黃龍病菌材料各部位的內生細菌數(shù)量,各部位菌量依次為健根>病根>健葉>病葉>健莖>病莖;依據(jù)細菌16SrDNA序列比對分析,不帶菌材料17株內生細菌分屬于10個