豬肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)基因的mRNA表達(dá)及功能分析.pdf

1、隨著人們生活水平的提高，豬肉品質(zhì)已引起了消費(fèi)者和生產(chǎn)者的廣泛重視。肌內(nèi)脂肪（IMF）含量和背膘厚（BFT）是影響豬肉品質(zhì)的兩個重要指標(biāo)，其中，IMF 對肉的嫩度、多汁性和風(fēng)味有明顯的正效應(yīng)。本研究以遺傳背景有較大差異的地方品種萊蕪豬、培育品種魯萊黑豬、引入品種大白豬為研究對象，對影響豬脂肪細(xì)胞分化和脂肪細(xì)胞肥大的DGAT1、DGAT2、ADD1、PPARγ、ADRP和PID1 六個候選基因進(jìn)行了定量表達(dá)檢測和遺傳分析；進(jìn)一步對其中與肌內(nèi)

2、脂肪顯著相關(guān)的PID1基因，研究構(gòu)建真核表達(dá)載體，并通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染進(jìn)行鑒定，旨在為基因功能的驗證奠定基礎(chǔ)以及為豬肉質(zhì)改良的標(biāo)記輔助選擇（MAS）篩選有效的分子標(biāo)記提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果總結(jié)如下：
　　 一、優(yōu)化建立了TaqMan探針定量分析法，并與SYBR Green real-time PCR方法進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，利用TaqMan 探針法對ADD1基因進(jìn)行定量表達(dá)檢測，能夠比SYBR Green real-time PC

3、R更加快速和準(zhǔn)確，且不影響相關(guān)分析結(jié)果。ADD1基因在萊蕪豬脂肪組織中表達(dá)量最高，在肝臟中未見明顯表達(dá)，并且脂肪組織和肌肉組織間的表達(dá)量差異顯著（P<0.05）。ADD1基因的mRNA表達(dá)量在肌肉組織中與IMF含量呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。
　　 二、DGAT1和DGAT2 在同一豬種不同組織中的mRNA表達(dá)水平有顯著差異（P<0.05），總體表現(xiàn)為：肝臟>脂肪>肌肉；在不同品種豬的3種組織中的mRNA表達(dá)量總體表現(xiàn)為：萊蕪

4、豬>魯萊黑豬>大白豬；但DGAT1基因在不同品種豬脂肪組織中的表達(dá)順序為：大白豬>魯萊黑豬>萊蕪豬；相關(guān)性分析結(jié)果表明，DGAT1基因在3種豬品種間的肝臟組織中mRNA表達(dá)量與BFT 呈顯著正相關(guān)（P<0.05）；DGAT2基因在3種豬品種間的肌肉組織中mRNA表達(dá)量與IMF含量呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。
　　 三、PPARγ和ADRP基因在3個品種豬的肌肉組織中的mRNA表達(dá)量總體表現(xiàn)為：
　　 萊蕪豬>魯萊黑豬>

5、大白豬；相關(guān)性分析結(jié)果表明，PPARγ的mRNA表達(dá)量在3個豬種的肌肉中mRNA表達(dá)量與IMF 呈顯著正相關(guān)（P<0.05），ADRP的mRNA表達(dá)量在3個豬種的肌肉中與IMF相關(guān)不顯著（P>0.05），PPARγ的mRNA表達(dá)量與ADRP的mRNA表達(dá)量呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）。證實了PPARγ與脂肪沉積性狀存在一定的內(nèi)在聯(lián)系，也提示PPARγ和ADRP基因之間存在一定的聯(lián)系，其結(jié)果為進(jìn)一步研究萊蕪豬高肌內(nèi)脂肪沉積的分子調(diào)控機(jī)制

6、提供了新的資料。
　　 四、豬品種因素對PID1基因的mRNA表達(dá)量具有顯著效應(yīng)（P<0.05），總體表現(xiàn)為：萊蕪豬>魯萊黑豬>大白豬。不同組織對PID1基因的mRNA表達(dá)量具有顯著效應(yīng)（P<0.05），總體表現(xiàn)為：肝臟>脂肪>肌肉。品種與組織之間的互作對該基因表達(dá)量也具有顯著影響（P<0.05）；相關(guān)性分析結(jié)果表明：不同品種間的三種組織中PID1基因的mRNA表達(dá)量與IMF含量之間呈現(xiàn)出顯著正相關(guān)（P<0.05）。
　　

7、 五、PID1基因的真核表達(dá)載體構(gòu)建與遺傳鑒定克隆得到PID1基因的編碼區(qū)序列，成功構(gòu)建了PID1基因的真核表達(dá)載體，命名為：
　　 pcDNA3.1(+)/PID1。采用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染山羊毛囊細(xì)胞，RT-PCR 檢測PID1基因的mRNA水平的表達(dá)，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)/PID1質(zhì)粒的毛囊細(xì)胞中PID1基因的表達(dá)水平顯著高于對照組轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的毛囊細(xì)胞（P<0.05）；Western blotting檢測PID

8、1翻譯水平的表達(dá)，結(jié)果表明，PID1基因的蛋白得到有效表達(dá)。這些研究結(jié)果為進(jìn)一步驗證PID1基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
　　 綜上所述，采用熒光定量分析、克隆測序、Western blotting、真核表達(dá)載體構(gòu)建和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等一系列研究方法，對參與脂肪形成與分化和肌內(nèi)脂肪代謝調(diào)控的相關(guān)基因進(jìn)行了研究，并對其中與IMF沉積顯著相關(guān)的PID1基因進(jìn)行了進(jìn)一步的功能分析，所得研究結(jié)果為進(jìn)一步揭示豬肌肉中的脂肪沉積與遺傳機(jī)理奠定了重要的分子