上海、廣州等地市售與上海入境黃鱔、泥鰍中顎口線蟲調(diào)查與分類鑒定.pdf

1、顎口線蟲是一種食源性人畜共患寄生蟲，由該蟲引起的人體病例呈世界性分布，其對人類健康的危害不容小覷。而在我國對顎口線蟲病缺乏相應(yīng)的重視，也尚未有本病相關(guān)的防疫標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，使人類的公共衛(wèi)生安全受到威脅。因此，本研究隨機調(diào)查了我國上海、廣州等地市售部分水產(chǎn)品中顎口線蟲的感染情況，查清危害我國食品安全的主要顎口線蟲蟲種，旨在為本病的防治以及該蟲的進一步研究提供新的依據(jù)及思路。
　　 本研究調(diào)查了國內(nèi)7個省市顎口線蟲11種中間宿主，除了黃鱔

2、、泥鰍外，其余品種的淡水魚樣本數(shù)量較少，且未檢出陽性結(jié)果，不具有統(tǒng)計學(xué)意義，因此將黃鱔與泥鰍的感染情況作為本次調(diào)查的描述重點。本次調(diào)查在上海、廣州、南寧黃鱔和廣州、黑龍江泥鰍中發(fā)現(xiàn)顎口線蟲第三期幼蟲，其中廣州的黃鱔感染率最高，為14%。另外，對上海進境的來自3個國家的14批黃鱔進行顎口線蟲檢疫，其中有12批黃鱔檢出顎口線蟲第三期幼蟲，均來自菲律賓和印度尼西亞。并且印度尼西亞黃鱔的平均感染率最高，為63.9%，檢出顎口線蟲總數(shù)最多，但菲律

3、賓黃鱔平均感染強度較印度尼西亞稍高。
　　 為了鑒定所檢獲的顎口線蟲所屬蟲種，本研究通過對顎口線蟲進行光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡的觀察，測量及分析蟲體形態(tài)特征數(shù)據(jù)。初步確定廣西疾病預(yù)防控制中心(CDC)提供的福建野豬中檢出的顎口線蟲為杜氏顎口線蟲(G.doloresi)成蟲；黑龍江與廣州泥鰍中檢出的顎口線蟲為日本顎口線蟲(G.nipponicum)早第三期幼蟲；上海黃鱔中檢出的為剛刺顎口線蟲(G.hispidum)晚第三期幼蟲；南寧、

4、廣州、菲律賓黃鱔中檢到的均為棘顎口線蟲(G.spinigerum)晚第三期幼蟲；印度尼西亞黃鱔中的顎口線蟲多數(shù)為棘顎口線蟲(G.spinigerum)晚第三期幼蟲，有1條日本顎口線蟲(G。nipponicum)晚第三斯幼蟲，2條剛刺顎口線蟲(G.hispidum)晚第三期幼蟲。
　　 其次，運用PCR方法擴增了已經(jīng)進行形態(tài)觀察的顎口線蟲以及由吳慧芳在2009年搜集的宜州棘顎口線蟲三期幼蟲的核糖體核酸內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔2基因(rDNA-I

5、TS2)和部分線粒體細胞色素c氧化酶亞基I基因(CO1)，并測序進行序列分析。發(fā)現(xiàn)序列分析的結(jié)果與形態(tài)學(xué)鑒定預(yù)期的結(jié)果一致，進一步證實鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。并且分析兩個基因的特征，發(fā)現(xiàn)顎口線蟲ITS2基因種間差異較大適合用作蟲種鑒定，CO1基因種內(nèi)差異較明顯，可用于顎口線蟲種內(nèi)基因變異的研究。棘顎口線蟲(G.spinigerum)CO1基因呈現(xiàn)至少4種基因型，從表面看分型跟地理分布并沒有明顯的關(guān)系，但可以看出印度尼西亞、菲律賓、越南以及中國

6、兩廣地區(qū)的棘顎口線蟲關(guān)系都較近。剛刺顎口線蟲(G.hispidum)ITS2與CO1基因明顯呈現(xiàn)2種差別較大的基因型。顎口線蟲ITS2與CO1基因序列上的差異與形態(tài)上的差異無關(guān)。
　　 最后，利用顎口線蟲ITS2基因的差異性，首次以ITS2為目的基因?qū)€口線蟲、杜氏顎口線蟲、日本顎口線蟲3種顎口線蟲設(shè)計特異引物并建立多重PCR鑒定蟲種的方法，國內(nèi)外目前尚未有相關(guān)的文獻報道。經(jīng)驗證該方法簡單、快速，特異性強，重復(fù)性高，僅通過條帶