巫山淫羊藿組織培養(yǎng)研究.pdf

1、巫山淫羊藿是我國傳統(tǒng)的藥用植物，收載于2010年版《中國藥典》，已有2000多年的用藥歷史。研究表明巫山淫羊藿有明顯的生理活性和藥理作用，具有很大的開發(fā)價(jià)值。目前，對巫山淫羊藿組織快繁的研究報(bào)道較少。利用生物技術(shù)手段繁育巫山淫羊藿，可以在較短的時(shí)間內(nèi)獲得大量的種苗，對于保護(hù)巫山淫羊藿野生資源、保證藥源，實(shí)現(xiàn)其可持續(xù)利用都有十分重要的意義。本文通過研究巫山淫羊藿不同外植體消毒方法、愈傷組織誘導(dǎo)與分化、叢生芽誘導(dǎo)與增殖、試管苗生根等方面，探

2、討了巫山淫羊藿組培快繁的技術(shù)方法。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)外植體選擇與表面滅菌:巫山淫羊藿葉片、總?cè)~柄頂端、芽和種胚為初代啟動(dòng)培養(yǎng)的最佳外植體。外植體最佳消毒方法為75％酒精消毒30 s，再用0.1％ HgCl2消毒，分別為葉和總?cè)~柄頂端消毒各6 min，芽連續(xù)兩次消毒(4+2) min，污染率可控制在5％以內(nèi)，存活率在75％以上。種子接種前用0.1％ HgCl2消毒2 min，存活率為50％。
　　 (2)愈傷

3、組織誘導(dǎo):愈傷組織誘導(dǎo)中，2，4-D和IBA達(dá)到了極顯著水平;各種外植體誘導(dǎo)效果依次為總?cè)~柄頂端、葉片、種胚，但葉和總?cè)~柄頂端誘導(dǎo)的愈傷組織不易分化且后期發(fā)生褐化;葉誘導(dǎo)愈傷組織時(shí)WPM培養(yǎng)基比MS、B5、N6更適宜愈傷組織誘導(dǎo)和生長，降低褐化率;種胚誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+2，4-D2mg·L-1+IBA2 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1;葉誘導(dǎo)愈傷組織最佳培養(yǎng)基為WPM+2，4-D2mg·L-1+6-BA0.5 m

4、g·L-1，誘導(dǎo)率為79.2％。
　　 (3)愈傷組織分化:在愈傷組織分化中，6-BA和NAA達(dá)到了極顯著水平;種胚愈傷組織易分化出芽，而葉和總?cè)~柄頂端誘導(dǎo)的愈傷組織沒有分化出芽。種胚愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)為MS+6-BA1 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+IBA1 mg·L-1，分化率為73.3％。
　　 (4)叢生芽誘導(dǎo)與增殖:以巫山淫羊藿的種胚和芽為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，均可直接誘導(dǎo)出芽。芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為

5、WPM+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+GA30.5 mg·L-1，誘導(dǎo)率為75.5％，誘導(dǎo)芽過程WPM培養(yǎng)基和6-BA達(dá)到極顯著水平;種胚誘導(dǎo)芽時(shí)6-BA起到了決定作用，且誘導(dǎo)率與生長素和細(xì)胞分裂素的比值有密切關(guān)系，種胚誘導(dǎo)芽最適培養(yǎng)基為MS+IBA2 mg·L-1+6-BA0.5 mg·L-1，誘導(dǎo)率為77.8％。細(xì)胞分裂素濃度對叢生芽增殖起決定作用，叢生芽增殖的適宜培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg·L-1