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文檔簡介
1、本研究以尾狀山羊草(Y46)為材料,克隆了其高分子量谷蛋白亞基(HMW-GS)、低分子量谷蛋白亞基(LMW-GS)、α-,γ-和ω-醇溶蛋白的編碼基因,并根據(jù)其編碼基因推導出氨基酸序列,以此為基礎分析了它們的分子結構。主要結果如下:
1、SDS-PAGE分析了Y46的HMW-GS組成,結果表明,Y46共有兩個HMW-GS,根據(jù)HMW-GS的分子量確認分子量較大的為x亞基,較小的為y亞基。x亞基的遷移率比1Ax1略大,y亞基
2、的遷移率在1By8和1By9之間。根據(jù)HMW-GS的命名規(guī)則,將這兩個亞基分別命名為1Cx1.1和1Cy9.1。
2、利用已公布的HMW-GS編碼基因的保守區(qū)設計了一對兼并引物,對Y46的基因組DNA進行擴增,得到了1Cx1.1和1Cy9.1的編碼序列,分別為2631bp和1932bp。經過分析推導出的氨基酸序列,表明所克隆的兩個基因與已知的HMW-GS具有較高的同源性,其蛋白分子可分為四個結構域:一、信號肽(在成熟的蛋白
3、質中被切除);二、保守的N末端;三、存在較大變異的中央重復區(qū);四、保守的C末端。1Cx1.1的氨基酸序列較大,雖然沒有額外的半胱氨酸殘基,但是其大量的氫鍵依然對面粉的品質具有正向作用,此外,在1Cx1.1的重復區(qū)中存在一個特殊的三肽-三肽串聯(lián)結構,在已知的x亞基中極少出現(xiàn)。1Cy9.1的N端第31位氨基酸由纈氨酸替換了丙氨酸。原核表達進一步表明,克隆的這兩個基因體外表達的蛋白與HMW-GS具有相同的電泳遷移率。
3、利用已
4、公布的LMW-GS編碼基因設計一對引物進行擴增,經測序分析共得到兩個LMW-GS的編碼基因,分別命名為Y46-LMW1和Y46-LMW2。將推導出的氨基酸序列與已公布的LMW-GS進行多重序列比對,這兩個LMW-GS分別為i型和m型亞基,它們的結構與已知的LMW-GS有極高的相似性,僅僅存在個別氨基酸的差異。
4、本試驗克隆得到5個α-醇溶蛋白基因,6個γ-醇溶蛋白基因和5個ω-醇溶蛋白基因,經與已知對應的蛋白進行相似度比
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