小尾寒羊無角基因的分子標(biāo)記和δ差異顯示分析研究.pdf

1、小尾寒羊作為肉裘兼用型綿羊的品種，在國內(nèi)外都享有盛名，它是培育我國肉用羊品種的優(yōu)秀母本。對(duì)河北小尾寒羊來說無論公、母羊均表現(xiàn)為無角性狀。由于部分河北小尾寒羊與山東小尾寒羊進(jìn)行了雜交，致使有的河北小尾寒羊表現(xiàn)出有角性狀，這給肉用無角羊的選育和生產(chǎn)實(shí)踐帶來了很多不便。因此，本文利用分子標(biāo)記技術(shù)和δ差異顯示技術(shù)對(duì)小尾寒羊無角基因進(jìn)行了相關(guān)分析研究，從而為培育優(yōu)良的純合無角品種奠定基礎(chǔ)。
　　 利用PCR-RFLP技術(shù)研究了不同角型的三

2、個(gè)品種綿羊（（即道賽特（無角）、河北小尾寒羊（無角）、雜種蒙古羊（有角））SYNJ1基因位點(diǎn)上一個(gè)C/T突變與角型的相關(guān)性。結(jié)果表明:在經(jīng)HapⅡ限制酶酶切后，在群體中產(chǎn)生了TT、CT及CC三種基因型，經(jīng)過獨(dú)立性卡方檢驗(yàn)后，不同角型品種個(gè)體基因型頻率差異達(dá)到極顯著水平(P＜0.01)。說明SYNJ1基因361位點(diǎn)上的SNP與羊的無角和有角沒有關(guān)聯(lián)性。
　　 為了進(jìn)一步篩選出與小尾寒羊角型相關(guān)的新基因，利用δ差異顯示技術(shù)對(duì)小尾寒羊

3、（有角）、河北小尾寒羊（無角）、河北小尾寒羊長角基及此群體中無角的小尾寒羊的羔羊的頭部角生長點(diǎn)的皮膚組織為樣本組成四個(gè)RNA池，進(jìn)行差異顯示研究。結(jié)果從聚丙烯酰胺凝膠檢測中共篩選得到差異片段110條，經(jīng)二次PCR后有80條差異片段得到了單一性擴(kuò)增，再經(jīng)RT-PCR剔除假陽性后，剩余63條差異片段。然后提交此63條序列至GenBank中，經(jīng)BLAST分析，與NCBI數(shù)據(jù)庫中序列已知的基因片段進(jìn)行比對(duì)，其中有45條片段在NCBI中未發(fā)現(xiàn)存在

4、高度同源序列，認(rèn)定為新發(fā)現(xiàn)的表達(dá)片段;另12條片段主要和牛、羊等的BAC中的序列有較高的相似性，其相似程度一般在80％以上，但它們的功能不詳;其余6條片段分析結(jié)果為:175號(hào)片段與山羊微衛(wèi)星DNOK281相似度達(dá)97％，但其功能尚不清楚;180號(hào)片段與預(yù)測的綿羊載脂蛋白B的mRNA的相似性為97％，載脂蛋白B主要是幫助細(xì)胞來識(shí)別并攝取低密度脂蛋白(LDL);148號(hào)片段與預(yù)測的綿羊延伸因子1-alpha1-like的mRNA相似性為96

5、％，延伸因子主要是在mRNA翻譯時(shí)，促進(jìn)多肽鏈延伸的;275-1號(hào)片段與人17號(hào)染色體克隆片段RP11-279B10(HCIT307A16)完整序列的相似性為99％，其功能也未知;195號(hào)片段與人的SYN3基因片段相似性為100％，突觸蛋白是磷酸蛋白家族蛋白，它具有神經(jīng)元特異性且與突觸小泡相關(guān)聯(lián);50號(hào)片段與預(yù)測的綿羊的UBXdomainprotein1(UBXN1)的mRNA（327-600，翻譯區(qū)）相似性達(dá)100％，與牛（395-6