小尾寒羊無角性狀的DNA標記及其差異表達基因的篩選研究.pdf

1、培育無角羊品種在養(yǎng)羊生產(chǎn)中具有很多的優(yōu)勢。無角羊不易破壞圍欄,在舍飼時占舍面積相對少,且也減少了角生長所需的營養(yǎng),同時減少角斗傷殘的損失,無角羊較有角羊便于管理。在澳大利亞已培育成無角陶賽特羊優(yōu)良品種,無角羊已成為羊品種的發(fā)展趨勢。所以,培育無角綿羊品種對畜牧業(yè)發(fā)展具有很大的意義。本實驗通過分子生物學方法尋找與綿羊角相關(guān)的基因,為今后培育無角綿羊品種提供理論依據(jù)。其研究結(jié)果如下:1、微衛(wèi)星標記的研究:實驗以河北小尾寒羊、無角道賽特、雜種

2、蒙古羊三個品種不同角型的羊為樣本,對微衛(wèi)星位點AGLA226進行擴增檢測。實驗共找出8個等位基因(A:190bp、B:166bp、C:184bp、D:160bp、E:180bp、F:156bp、G:175bp、H:152bp),4種基因型AB、CD、EF、GH。通過SPSS軟件對實驗結(jié)果進行獨立性卡方檢驗,結(jié)果表明角型與微衛(wèi)星AGt,A226的關(guān)聯(lián)性差異不顯著(P>0.05)。
　　 2、SNPs分析:本研究利用PCR—SSCP

3、的技術(shù),以牛SYNJ1基因序列為引物,以三個牛品種(有角荷斯坦奶牛、無角安格斯、無角海福特牛)以及無角河北小尾寒羊、無角道賽特、雜種蒙古羊三個品種不同角型的羊DNA為模版,對SYNJ1基因進行SSCP分析及PCR產(chǎn)物測序。結(jié)果表明:在SNP bSYNJ1_C3981T位點上未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性及與角性狀相關(guān)的SNP,在牛羊物種間只存在一個C-T核苷酸差異。
　　 3、DDRT-PCR的研究:實驗以有角和無角綿羊各3只為樣本,分別提取總

4、RNA。根據(jù)表型組成有角RNA池和無角RNA池。反轉(zhuǎn)錄后兩角型的cDNA進行DDRT-PCR分析,共篩選出30條差異片段,經(jīng)過二次擴增、克隆測序等方法剔除假陽性后,剩余7條差異片段。以該7條片段的測序結(jié)果設計引物,再以原RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進行擴增再進一步剔除假陽性片段,最后剩余一條差異片段S1-162。經(jīng)生物信息學分析,在GenBank里分析發(fā)現(xiàn)該片段序列與綿羊的keratin83(角蛋白83)的mRNA序列(1687-184