通過基因芯片技術篩選肝癌差異表達基因的初步研究.pdf

1、目的：(1)研究肝癌細胞系的基因表達概況,尋找在肝癌細胞系中差異表達基因,探索肝癌發(fā)生發(fā)展的機制。(2)在差異表達基因中進一步篩選抑制細胞凋亡相關基因,探索其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：第一部分通過基因芯片技術檢測肝癌細胞系Bel-7402、Hep-3B與L-02肝細胞的全基因組序列,分析其基因表達譜差異。第二部分進一步篩選表達差異的抑制細胞凋亡相關基因,利用RT-PCR在Bel-7402、Hep-3B、L-02細胞系中對篩

2、選出的差異表達基因進行了驗證。隨后,利用免疫組化檢測差異表達基因在20例肝癌及其癌旁組織中的表達情況。 結果：第一部分在檢測的54614個探針組中,Bel-7402、Hep-3B兩株肝癌細胞與L-02肝細胞相比表達共同上調兩倍及兩倍以上的有1452個基因；表達下調2倍及2倍以上的有2054個基因。涉及凋亡、細胞粘附、細胞周期等多種生物學過程,鈣離子信號通路、G蛋白信號通路等多種信號通路。第二部分進一步篩選出與抑制細胞凋亡相關表達

3、上調的基因有12個,選取其中的SODD與Survivin基因行RT-PCR與免疫組化,RT-PCR結果顯示其在Bel-7402與Hep-3B肝癌細胞中的表達明顯高于L-02肝細胞(P<0.05)。免疫組化結果顯示SODD與Survivin在肝癌組織中的陽性率明顯高于癌旁組織(65％vs 15％,and 75％vs 20％,P<0.05)。 結論：(1)肝癌的發(fā)生、發(fā)展是由數千個癌癥相關基因異常表達進而引起多種生物學功能異常的綜合