通過基因芯片技術(shù)篩選肝癌差異表達基因的初步研究.pdf

1、目的：(1)研究肝癌細胞系的基因表達概況,尋找在肝癌細胞系中差異表達基因,探索肝癌發(fā)生發(fā)展的機制。(2)在差異表達基因中進一步篩選抑制細胞凋亡相關(guān)基因,探索其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：第一部分通過基因芯片技術(shù)檢測肝癌細胞系Bel-7402、Hep-3B與L-02肝細胞的全基因組序列,分析其基因表達譜差異。第二部分進一步篩選表達差異的抑制細胞凋亡相關(guān)基因,利用RT-PCR在Bel-7402、Hep-3B、L-02細胞系中對篩

2、選出的差異表達基因進行了驗證。隨后,利用免疫組化檢測差異表達基因在20例肝癌及其癌旁組織中的表達情況。 結(jié)果：第一部分在檢測的54614個探針組中,Bel-7402、Hep-3B兩株肝癌細胞與L-02肝細胞相比表達共同上調(diào)兩倍及兩倍以上的有1452個基因；表達下調(diào)2倍及2倍以上的有2054個基因。涉及凋亡、細胞粘附、細胞周期等多種生物學(xué)過程,鈣離子信號通路、G蛋白信號通路等多種信號通路。第二部分進一步篩選出與抑制細胞凋亡相關(guān)表達

3、上調(diào)的基因有12個,選取其中的SODD與Survivin基因行RT-PCR與免疫組化,RT-PCR結(jié)果顯示其在Bel-7402與Hep-3B肝癌細胞中的表達明顯高于L-02肝細胞(P<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示SODD與Survivin在肝癌組織中的陽性率明顯高于癌旁組織(65％vs 15％,and 75％vs 20％,P<0.05)。 結(jié)論：(1)肝癌的發(fā)生、發(fā)展是由數(shù)千個癌癥相關(guān)基因異常表達進而引起多種生物學(xué)功能異常的綜合