亞甲基藍(lán)檢測(cè)方法及其在鯽魚體內(nèi)代謝變化研究.pdf

1、抗真菌亞甲基藍(lán)是一種人工合成的噻嗪類染料，具有抗茵消毒作用，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中用作抗菌藥物，可以治療淡水魚類的小爪蟲病、斜管蟲病、水霉病和凡納濱對(duì)蝦幼體粘臟病，也可降低魚類運(yùn)輸中的死亡率。研究表明，亞甲基藍(lán)及其代謝物對(duì)動(dòng)物體有致突變等毒性作用，所以在美國(guó)、日本等國(guó)家，亞甲基藍(lán)被禁止用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，在國(guó)內(nèi)也未被批準(zhǔn)使用。目前關(guān)于亞甲基藍(lán)在水產(chǎn)品中殘留檢測(cè)的液質(zhì)方法研究較少，其代謝變化及目前的使用情況，還未有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，所以本文研究了其在水產(chǎn)品中的殘

2、留檢測(cè)方法及代謝變化，并作了江蘇省內(nèi)其使用情況的初步調(diào)查。具體內(nèi)容包括三個(gè)方面:
　　1.水產(chǎn)品中亞甲基藍(lán)及代謝物檢測(cè)方法的研究。建立了超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中亞甲基藍(lán)及其代謝物含量的分析方法。經(jīng)過條件優(yōu)化，試樣用10mL乙腈提取3次，并在體系中添加鹽酸羥胺、對(duì)甲苯磺酸等提高提取效率，提取液經(jīng)對(duì)丙磺酸固相萃取小柱凈化，按V（乙腈）∶V（乙酸銨，1mol·L-1）=1∶1洗脫，采用ThermoHypersil

3、C18色譜柱，以甲醇和0.2％甲酸為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫分離，電噴霧離子源(ESI)，正離子模式，采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）掃描模式。結(jié)果表明，亞甲基藍(lán)及代謝物（天青A、天青B、天青C）在0.50～100.00μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R＞0.99，在10min內(nèi)實(shí)現(xiàn)分離，3個(gè)加標(biāo)水平(2μg·kg-1、4μg·kg-1、10μg·kg-1)的平均回收率為74.23％～94.40％(n=6)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.13

4、％～％10.28％,檢測(cè)限(LOD)為0.40～0.60μg·kg-1，定量限(LOQ)為2.00μg·kg-1。該方法簡(jiǎn)便快捷、準(zhǔn)確度高，易于推廣應(yīng)用，可作為快速測(cè)定水產(chǎn)品中亞甲基藍(lán)及其代謝物的有效方法。
　　2.亞甲基藍(lán)在鯽魚體內(nèi)的代謝變化研究。使用不同濃度（1mg·L-1和10mg·L-1）的亞甲基藍(lán)原藥溶液，和不同的藥浴時(shí)間（10min和30min）對(duì)鯽魚進(jìn)行藥浴，研究其代謝變化。結(jié)果表明:當(dāng)用亞甲基藍(lán)藥浴浸泡鯽魚后，以原

5、藥的形式被鯽魚從腮部和口腔、皮膚等部位吸收，在體內(nèi)一邊富集，一邊開始分解和排泄，4種目標(biāo)物（亞甲基藍(lán)、天青A、天青B、天青C）在鯽魚體的三個(gè)不同部位的分布量多少為腮部＞肝臟＞肌肉，且肌肉中以天青A、天青B為主要形式，肝臟中以亞甲基藍(lán)、天青A、天青B3種物質(zhì)為主要形式，腮中亞甲基藍(lán)為主要形式存在。藥浴時(shí)間對(duì)目標(biāo)物質(zhì)殘留量的影響要大于濃度的影響。
　　3.對(duì)于江蘇省部分城市水產(chǎn)品中亞甲基藍(lán)及其代謝物殘留狀況初步調(diào)查。結(jié)果表明，大部分水