甲基睪丸酮在羅非魚體內的消解規(guī)律及其檢測方法的研究.pdf

1、本研究采用建立的羅非魚各組織、魚苗體內甲基睪丸酮殘留的檢測方法,對大規(guī)模養(yǎng)殖環(huán)境條件下,使用甲基睪丸酮后在羅非魚魚苗和成魚體內的殘留消除規(guī)律進行了系統(tǒng)研究,旨在為行政主管部門制定監(jiān)督管理措施及羅非魚藥殘監(jiān)督溯源提供理論依據(jù)。
　　 首先通過比較篩選國內外相關研究,建立了適合于羅非魚各器官組織及其魚苗中甲基睪丸酮殘留測定的高效液相色譜法。樣品經(jīng)乙醚超聲波提取、石油醚凈化(血漿、膽汁中輔以固相萃取柱萃取),然后以ODS-C18柱,7

2、7％甲醇溶液洗脫分離,紫外檢測器檢測、外標法定量。該前處理方法能使目標物在色譜圖上有合適的保留時間、峰型好、目標峰與雜質峰完全分離,該法甲基睪丸酮濃度在0.040μg/mL～10.0μg/mL范圍內線性關系良好(R2=1.0000),樣品檢出限分別為:背肌、腹肌8μg/kg,魚皮、肝臟27μg/kg,性腺80μg/kg,血漿、膽汁80μg/L,魚苗20μg/kg。方法的回收率不低于80.6％,血漿、背肌、腹肌、魚苗、膽汁、肝臟、魚皮、性

3、腺的回收率分別為91.4％、88.0％、87.4％、88.9％、87.6％、83.6％、80.9％、80.6％。相對標準偏差不高于5.53％,魚苗、肝臟、血漿、背肌,膽汁、性腺、腹肌、魚皮分別為2.51％、3.59％、3.68％、3.96％、4.51％、4.49％、4.91％、5.53％。適用于羅非魚組織中甲基睪丸酮的檢測,同時為開展甲基睪丸酮在羅非魚體內殘留消解規(guī)律的研究奠定了基礎。
　　 接著運用建立好的高效液相色譜法檢測魚

4、苗體內的甲基睪丸酮的方法,研究了養(yǎng)殖場大規(guī)模養(yǎng)殖下,甲基睪丸酮用于尼羅羅非魚苗雄性化后在苗種體內的消解規(guī)律。分別采用含200mg/kg、50mg/kg、20mg/kg甲基睪丸酮的飼料持續(xù)喂養(yǎng)尼羅羅非魚苗30d來進行雄性化,隨后魚苗轉移到池塘來進行甲基睪丸酮的消解實驗,應用高效液相色譜法檢測不同時間魚苗體內甲基睪丸酮的殘留量,并用SPSS Statistics17.0統(tǒng)計軟件結合EXCEL2003進行數(shù)據(jù)處理和分析,來研究甲基睪丸酮的消解

5、規(guī)律。結果表明,兩次投喂間甲基睪丸酮在羅非魚體內是緩慢減少的且出現(xiàn)多峰現(xiàn)象,但是在羅非魚雄性化期間甲基睪丸酮在羅非魚體內具有一致性。此外,停藥后甲基睪丸酮的消解基本符合指數(shù)遞減,雖然甲基睪丸酮雄性化效果確實很好,但是甲基睪丸酮后期消解較為緩慢,且甲基睪丸酮濃度越大,在羅非魚魚苗體內殘留時間也越長。若養(yǎng)殖戶私下使用過量甲基睪丸酮來用于羅非魚的雄性化,或者在魚苗雄性化之后使用甲基睪丸酮的話,很難在上市之前完全代謝掉,那么消費者食用后就很可能

6、對身體造成一定的危害。因此強烈建議國家有關部門盡快研究出雄性化替代方法,如物理途徑溫度等來進行羅非魚的雄性化,從根本上一方面保障養(yǎng)殖戶的利益,一方面杜絕使用甲基睪丸酮。
　　 鑒于近年來羅非魚成魚中屢屢檢出甲基睪丸酮藥物殘留,本文在研究甲基睪丸酮在羅非魚苗體內的消解規(guī)律的基礎上,進一步研究了甲基睪丸酮用于羅非魚成魚促生長后在魚體內的消解規(guī)律。在現(xiàn)實養(yǎng)殖環(huán)境中,采用含甲基睪丸酮200mg/kg的飼料持續(xù)投喂羅非魚成魚3d,每天定時

7、投喂4次,每次喂藥飼料量約為羅非魚生物量的3％～5％,3d后停止喂藥,實驗魚轉移到養(yǎng)殖池塘。用先前建立的高效液相色譜法檢測用藥后不同時間背肌、腹肌、魚皮、肝臟、性腺、血漿、膽汁中藥物濃度,并用DAS2.1.1藥物代謝分析軟件結合EXCEL2003進行數(shù)據(jù)處理和分析,來研究甲基睪丸酮在各組織中的消解規(guī)律。結果發(fā)現(xiàn)背肌、腹肌、魚皮、膽汁、血漿、肝臟、性腺中的甲基睪丸酮殘留量趨勢為指數(shù)遞減,其中血漿中甲基睪丸酮為冪指數(shù)遞減。甲基睪丸酮在各組織

8、中均有分布,組織中甲基睪丸酮濃度分布從高到低依次為:膽汁、肝臟、性腺、血漿、魚皮、腹肌、背肌,暗示著甲基睪丸酮在魚體體內的代謝為肝膽代謝。在該條件下各組織中甲基睪丸酮殘留量在停藥后1164h(49d)時才無檢出,其中血漿在804h(34d)時無檢出。說明藥物代謝需要較長時間,若養(yǎng)殖戶私下在成魚階段使用甲基睪丸酮,若離上市時間較短,那就很難保證在上市之前能完全代謝完。為了消費者的安全,養(yǎng)殖成魚階段應杜絕使用甲基睪丸酮,相關部門應嚴厲打擊懲