毛烏素沙地土壤生物結皮細菌多樣性分析與拮抗菌株5A5-3的篩選鑒定.pdf

1、本文以毛烏素沙地土壤生物結皮為研究對象,采用稀釋平板法統(tǒng)計了土壤生物結皮及結皮下土壤層各樣品的細菌生物量；根據(jù)平板菌落形態(tài)差異分離菌株,通過測定分離菌株的16S rDNA序列,進行細菌種屬鑒定和種群多樣性分析。以分離到的細菌菌株為研究對象,通過對峙試驗篩選得到對蘭花根腐病病原菌有較強拮抗作用的細菌5A5-3,并對5A5-3進行了生理生化鑒定和16S rDNA序列分析。研究所得的主要結果如下：
　　 ⑴可培養(yǎng)細菌分離生物量數(shù)量級為

2、105,各取樣點結皮層樣品細菌生物量略高于土壤層,各方向隨距離變化所采集樣品分離到的細菌種類數(shù)和生物量變化沒有相一致的趨勢。生物結皮樣品分離到的細菌菌落表型豐富,共獲得190株菌落表型差異的細菌,結皮下土壤層樣品得到表型差異的細菌84株。
　　 ⑵獲得的274株細菌的16S rDNA有效序列測序后進行BLAST比對分析,除5株與已報道的菌株序列相似性低于97％,其余均大于等于97％。根據(jù)序列相似性分析,生物結皮樣品中測序的186

3、株細菌劃分在60個分類單元,而土壤樣品中測序的83株細菌劃分在29個分類單元。生物結皮樣品的物種豐富度(S),Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(H)和均勻度指數(shù)(D)分別為22.25±2.06,2.7016±0.0567和0.9081±0.0189,土壤樣品的物種豐富度(S),Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(H)和均勻度指數(shù)(E)分別為13.00±2.45,2.3093±0.2037和0.8329±0.0735,其中生物結

4、皮物種豐富度(S),多樣性指數(shù)(H)和均勻度指數(shù)(E)分別都明顯優(yōu)于土壤樣品,而優(yōu)勢度指數(shù)(D)顯示土壤樣品高于結皮樣品。
　　 ⑶細菌種群多樣性分析表明,生物結皮樣品和土壤樣品分離到的細菌類群分布在厚壁菌門(Fimicutes),放線菌門(Actinobacteria),變形菌門(Proteobacteria)和擬桿菌門(Bacteroidetes)。芽孢桿菌屬(Bacillus)為所研究樣品的優(yōu)勢菌屬,在結皮和土壤樣品中的分

5、離頻率分別為86.84％和56.41％。四個主風向不同距離采集的樣品多樣性顯示各采樣點細菌多樣性分布差異明顯。
　　 ⑷從生物結皮分離的菌株,有4株與數(shù)據(jù)庫里已報道的細菌相似性低于97％,土壤樣品中只分離出1株相似性低于97％的細菌,證明生物結皮有優(yōu)于土壤發(fā)現(xiàn)新型菌的潛力。并從分離到的274株細菌菌株中篩選到1株對蘭花根腐病病原菌尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporium)和串珠鐮孢菌(Fusarium monilifo