梅山與長(zhǎng)白母豬糞樣微生物利用纖維能力比較.pdf

1、日糧纖維在母豬實(shí)際生產(chǎn)上有重要作用，能為母豬提供能量、改善動(dòng)物福利、促進(jìn)機(jī)體健康以及提高母豬繁殖性能。母豬腸道內(nèi)的纖維降解主要來(lái)自微生物的發(fā)酵，因此，腸道內(nèi)纖維降解微生物的研究就成為近年來(lái)腸道營(yíng)養(yǎng)研究的一個(gè)前沿和熱點(diǎn)。一般認(rèn)為，我國(guó)優(yōu)秀地方品種豬梅山豬較外來(lái)品種（如長(zhǎng)白豬）更耐粗飼，因而推測(cè)梅山豬腸道微生物降解纖維能力可能較長(zhǎng)白豬強(qiáng)，但是，系統(tǒng)地比較這兩種豬腸道菌群對(duì)纖維的降解的研究還不多。因此，本論文首先利用16S rRNA基因分子技

2、術(shù)對(duì)梅山豬和長(zhǎng)白豬糞樣中的纖維降解菌進(jìn)行定量分析，再通過(guò)體外發(fā)酵試驗(yàn)，以兩種豬糞樣為接種物，比較其對(duì)八種纖維底物的降解差異。本論文研究分三部分:
　　 1、梅山與長(zhǎng)白母豬糞樣中纖維降解菌區(qū)系的比較
　　 通過(guò)對(duì)比梅山與長(zhǎng)白豬糞樣中總細(xì)菌、擬桿菌屬、柔嫩梭菌、琥珀酸絲狀桿菌、黃化瘤胃球菌和白化瘤胃球菌的差異，初步探討不同品種對(duì)母豬后腸微生物區(qū)系的影響。變性梯度凝膠電泳（Denaturing gradient gel ele

3、ctrophoresis，DGGE）分析表明，梅山與長(zhǎng)白母豬糞樣菌群圖譜中存在許多共同條帶，兩品種樣品間相似性較高，大于65％。對(duì)DGGE圖譜進(jìn)行多樣性分析顯示多樣性指數(shù)結(jié)果不顯著（P＞0.05）。進(jìn)一步對(duì)梅山和長(zhǎng)白母豬糞樣中總細(xì)菌、擬桿菌、柔嫩梭菌、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌、黃化瘤胃球菌、白化瘤胃球菌進(jìn)行Real-time PCR定量分析，結(jié)果表明:梅山母豬糞樣中的總細(xì)菌的16S rRNA基因拷貝數(shù)顯著高于長(zhǎng)白母豬(P＜0.05);而產(chǎn)琥珀酸

4、絲狀桿菌、黃化瘤胃球菌、白化瘤胃球菌等纖維降解菌拷貝數(shù)均差異不顯著，梅山母豬糞樣中柔嫩梭菌的數(shù)量有高于長(zhǎng)白母豬的趨勢(shì)（P=0.075），但是差異不顯著;長(zhǎng)白母豬糞樣中擬桿菌比例有高于梅山母豬的趨勢(shì)，但差異不顯著;梅山與長(zhǎng)白母豬糞樣中柔嫩梭菌、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌、黃化瘤胃球菌、白化瘤胃球菌占總菌的比例均差異不顯著（P＞0.05）。
　　 2、梅山與長(zhǎng)白母豬糞樣微生物對(duì)不同纖維底物的體外發(fā)酵特性分析
　　 厭氧收集梅山與長(zhǎng)白母

5、豬新鮮糞樣，五倍稀釋后用作接種物，以果膠、微晶纖維素、菊粉、麥殼、麩皮、木聚糖、玉米渣及苜蓿粉為底物，體外發(fā)酵96 h，通過(guò)測(cè)定產(chǎn)氣量和揮發(fā)性脂肪酸VFA濃度的變化，研究梅山和長(zhǎng)白母豬腸道微生物對(duì)八種纖維底物的利用特性，同時(shí)為進(jìn)一步探討不同品種母豬腸道纖維降解菌區(qū)系的差異研究確定方法。結(jié)果表明，從發(fā)酵后9h至96 h結(jié)束，長(zhǎng)白豬接種物各組的累積產(chǎn)氣量顯著高于梅山豬（P＜0.05），長(zhǎng)白豬有機(jī)物校正產(chǎn)氣量極顯著高于梅山豬(P＜0.01)，

6、長(zhǎng)白豬T1/2和Tmax顯著低于梅山豬(P＜0.05），且發(fā)酵最終產(chǎn)乙酸和總VFA濃度顯著高于梅山豬接種物(P＜0.05)，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中不同底物間累積產(chǎn)氣量差異顯著（P＜0.05），累計(jì)產(chǎn)氣量從高到低的組別依次為:菊粉＞麩皮＞果膠＞苜蓿＞麥殼＞玉米渣＞木聚糖＞纖維素。而不同底物組乙酸、丙酸、丁酸和總VFA產(chǎn)生量與累積產(chǎn)氣量結(jié)果一致，菊粉、果膠、麩皮和苜蓿組產(chǎn)量顯著高于纖維素、玉米渣、麥殼和木聚糖組。
　　 3、梅山與長(zhǎng)白母豬糞

7、樣微生物對(duì)四種纖維底物的體外發(fā)酵及其纖維降解菌群分析
　　 通過(guò)體外發(fā)酵技術(shù)結(jié)合分子生態(tài)技術(shù)比較梅山和長(zhǎng)白母豬糞樣微生物對(duì)不同纖維底物體外發(fā)酵能力差異，并揭示發(fā)酵過(guò)程中纖維降解菌區(qū)系的變化。厭氧收集梅山與長(zhǎng)白母豬新鮮糞樣，五倍稀釋后用作接種物，以果膠、菊粉、麩皮及苜蓿為底物，體外發(fā)酵72 h，測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)產(chǎn)氣量，發(fā)酵液pH值和揮發(fā)性脂肪酸濃度(VFA);提取不同時(shí)間點(diǎn)發(fā)酵液中DNA，運(yùn)用PCR-DGGE分析不同品種、不同底物體

8、外發(fā)酵過(guò)程中總細(xì)菌區(qū)系變化;運(yùn)用Real-time PCR技術(shù)對(duì)發(fā)酵過(guò)程中總細(xì)菌、擬桿菌屬、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌、黃化瘤胃球菌、白化瘤胃球菌等纖維降解菌進(jìn)行定量。結(jié)果表明，DGGE圖譜顯示不同底物組樣品存在共同的細(xì)菌或纖維降解菌條帶，但也有特異的細(xì)菌或纖維降解菌條帶。發(fā)酵0h～48h，各組均微生物數(shù)量顯著增多，72h總細(xì)菌數(shù)目減少，底物特性菌減少。以果膠為發(fā)酵底物，梅山組產(chǎn)氣量、OMCV、Bacteroides拷貝數(shù)均顯著高于長(zhǎng)白豬，但產(chǎn)V