哈茨木霉rac基因的敲除.pdf

1、哈茨木霉是一種重要的生物防治真菌，能拮抗多種植物病原菌如立枯絲核菌、齊整小核菌、尖孢鐮孢菌、煙草疫霉等。在哈茨木霉拮抗病原菌的過程中病原菌會(huì)產(chǎn)生物理或化學(xué)信號(hào)分子。這些信號(hào)分子與哈茨木霉上相應(yīng)的信號(hào)分子受體結(jié)合使哈茨木霉上的受體激活。活化的受體會(huì)啟動(dòng)哈茨木霉細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑從而使木霉發(fā)生一系列細(xì)胞功能的改變。小G蛋白耦聯(lián)受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是一種重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。rac基因編碼的RAC蛋白是小G蛋白超家族中Rho家族的成員。rac

2、基因的功能在哺乳細(xì)胞中研究較深入但在絲狀真菌中的研究相對(duì)較少。對(duì)該基因的深入研究有助于揭示木霉拮病原菌的分子機(jī)制，并為闡明哈茨木霉中小G蛋白耦聯(lián)受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路奠定基礎(chǔ)。
　　本實(shí)驗(yàn)以與哈茨木霉親緣關(guān)較近的綠木霉為模板，通過設(shè)計(jì)一系列半隨機(jī)引物的方法成功獲得了哈茨木霉rac基因編碼區(qū)及其上下游的DNA序列共2741bp。其中哈茨木霉rac基因編碼區(qū)上游序列782bp，rac基因編碼區(qū)990bp，rac基因編碼區(qū)下游序列969

3、bp。比較哈茨木霉rac基因完整編碼區(qū)DNA序列與該基因的cDNA序列發(fā)現(xiàn)該基因編碼區(qū)含有五個(gè)內(nèi)含子，且五個(gè)內(nèi)含子均以GT起始以AG結(jié)尾。將rac基因編碼區(qū)DNA序列與全基因組測(cè)序的綠木霉，深綠木霉，里氏木霉DNA序列進(jìn)行序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)該基因編碼區(qū)的DNA序列與綠木霉部分DNA序列相似性最高。
　　根據(jù)獲得的rac基因編碼區(qū)及其側(cè)翼序列選擇恰當(dāng)?shù)拿盖形稽c(diǎn)構(gòu)建了兩種可以敲除哈茨木霉rac基因的質(zhì)粒載體pPZPTtk8.10::rac: