鏈霉菌菌株A與哈茨木霉T-23原生質(zhì)體融合技術(shù)系統(tǒng)構(gòu)建及融合菌株鑒定.pdf

1、　　本文研究鏈霉菌菌株A與哈茨木霉T-23兩遠(yuǎn)源菌株屬間原生質(zhì)體融合，構(gòu)建出最佳融合技術(shù)系統(tǒng)，確立了最佳篩選模型，并對(duì)所篩選出的融合菌株進(jìn)行了初步的鑒定。結(jié)果如下： 首先對(duì)出發(fā)菌株原生質(zhì)體制備和再生條件進(jìn)行優(yōu)化，經(jīng)多次重復(fù)試驗(yàn)所得結(jié)果為原生質(zhì)體融合時(shí)選擇適當(dāng)出發(fā)菌株原生質(zhì)體比例找到依據(jù)。鏈霉菌菌株A與哈茨木霉T-23屬于兩遠(yuǎn)源菌株，各自融合條件差異較大。試驗(yàn)中確立了原生質(zhì)體融合的篩選模型。試驗(yàn)對(duì)出發(fā)菌株原生質(zhì)體的融合條件進(jìn)行了篩

2、選。試驗(yàn)根據(jù)已經(jīng)建立的最佳融合技術(shù)系統(tǒng)及篩選模型，經(jīng)遺傳穩(wěn)定性檢驗(yàn)初步獲得16株融合菌株，選融合菌株中的兩株F1-16、F2-16作為初步鑒定對(duì)象。由于試驗(yàn)條件有限，僅通過一些簡(jiǎn)單而直觀的方法如菌落形態(tài)、融合菌株孢子形態(tài)、孢子大小，DNA含量、可溶性蛋白凝膠電泳等來對(duì)出發(fā)菌株及融合菌株的形態(tài)學(xué)和遺傳學(xué)方面特性進(jìn)行初步分析鑒定。資料顯示，測(cè)定孢子體積及DNA含量可鑒定雜合二倍體，試驗(yàn)對(duì)出發(fā)菌株及兩個(gè)融合菌株F1-16、F2-16孢子體積及

3、DNA含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)合顯微鏡檢孢子形態(tài)觀察結(jié)果，可以初步認(rèn)為融合菌株F2-16為雜合二倍體，融合菌株F1-16為單倍重組體。通過可溶性蛋白凝膠電泳譜帶分析，融合菌株F1-16除了具有與出發(fā)菌株相同的譜帶外，還有明顯的獨(dú)有譜帶，進(jìn)一步證明在融合分離過程中融合菌株F1-16發(fā)生了染色體片斷的交換或基因突變，產(chǎn)生了新組分的蛋白。對(duì)出發(fā)菌株及融合菌株的過氧化物酶同工酶電泳分析效果不理想，僅證明親本之一鏈霉菌菌株A的過氧化物酶同工酶含量較高，