雞胚成纖維細(xì)胞感染馬立克氏病病毒后3號(hào)染色體微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的研究.pdf

1、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability，MSI)廣泛存在于人類腫瘤的基因組中。雞馬立克氏病(MD)是雞的一種危害最嚴(yán)重的病毒所致的腫瘤性疾病，目前國內(nèi)外鮮有關(guān)于雞馬立克腫瘤發(fā)生后宿主基因組的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的報(bào)道，其他家畜腫瘤上也沒有宿主基因組MSI的研究報(bào)告。通過檢測(cè)雞胚成纖維細(xì)胞感染馬立克氏病超強(qiáng)毒RB1B株后，雞三號(hào)染色體上的基因組微衛(wèi)星不穩(wěn)定性情況，旨在發(fā)現(xiàn)是否存在與雞馬立克氏病發(fā)生相關(guān)的宿主基因組改

2、變，為從宿主的角度研究雞馬立克腫瘤發(fā)生和發(fā)展的生物學(xué)提供基礎(chǔ)研究資料。 在本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用27個(gè)SPF雞胚，培育雞胚成纖維細(xì)胞，來自同一雞胚個(gè)體的成纖維細(xì)胞一半接種馬立克氏病超強(qiáng)毒RB1B株，另一半不接毒，作為對(duì)照。分別提取培養(yǎng)細(xì)胞的基因組DNA，選取雞三號(hào)染色體上27個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，分別采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、PAGE電泳、銀染等技術(shù)檢測(cè)基因組微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。結(jié)果，27個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)中有20個(gè)出現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，平均變化頻率為16.30％

3、，變化頻率最高的為ABR141、MCW259、ABR426(25.93％)；沒有檢測(cè)到雜合性缺失。24例雞胚有兩個(gè)或兩個(gè)以上位點(diǎn)出現(xiàn)基因組變化。 本研究首次發(fā)現(xiàn)雞胚成纖維細(xì)胞感染馬立克氏病病毒后3號(hào)染色體上存在多位點(diǎn)的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。感染馬立克氏病病毒后CEF可出現(xiàn)多個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的改變，提示MDV感染CEF早期可能會(huì)整合到宿主的多個(gè)位點(diǎn)引起基因組的變化。以PCR、電泳和銀染為基礎(chǔ)的微衛(wèi)星技術(shù)可以快速、有效地檢測(cè)出染色體內(nèi)部基因組