高血糖激素(CHH)在對蝦滲透調節(jié)和血糖代謝中調控機制的初步研究.pdf

1、甲殼動物的滲透調節(jié)是維持甲殼動物正常生命活動的一項重要的生理功能,對甲殼動物滲透調節(jié)生理的研究也一直是國內外的熱點。目前對甲殼動物滲透調節(jié)的研究也取得了一些階段性的成果,但對甲殼動物滲透調節(jié)機制的深入研究還比較少,尤其是在神經(jīng)內分泌系統(tǒng)調控下甲殼動物滲透調節(jié)中相關通路因子的變化的研究更少。而凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)是當今世界養(yǎng)殖產量最高的三大蝦類之一,又是我國對蝦養(yǎng)殖產量中占總產量比例最高的品種。它具有很多

2、養(yǎng)殖優(yōu)勢,主要有生長速度較快、能夠適應高密度的養(yǎng)殖模式、適鹽范圍較廣、能夠在較低鹽度的養(yǎng)殖水中生長、對飼料的蛋白質含量要求較低等。所以本文選擇凡納濱對蝦作為研究對象,研究了凡納濱對蝦在甲殼動物高血糖激素(CHH)調控下相關滲透指標的變化,初步探討了神經(jīng)內分泌激素在凡納濱對蝦滲透調節(jié)中的作用以及通過通路中相關因子的變化來初步闡明這一機制。
　　 1、凡納濱對蝦高血糖激素(CHH)基因的克隆與序列分析
　　 甲殼動物高血糖激

3、素對于甲殼動物的生長發(fā)育生殖等生理生化過程具有重要作用。本實驗通過相近物種CHH氨基酸序列的同源性比對,根據(jù)保守氨基酸序列設計兼并引物,利用RT-PCR技術成功克隆了凡納濱對蝦CHH的部分核心cDNA序列。將凡納濱對蝦的CHH與其它物種的CHH進行同源性比較發(fā)現(xiàn),CHH基因具有高度保守性,同屬于對蝦屬中的CHH基因比較相似,聚于進化樹一個分支上。通過CHH的組織特異性研究發(fā)現(xiàn),CHH基因在腹神經(jīng),眼柄,心臟、肝胰臟和肌肉中有表達,肌肉中

4、的表達量相對較低,而在鰓中沒有表達。
　　 2、切除眼柄對凡納濱對蝦鰓絲離子調節(jié)信號轉導通路的影響
　　 本實驗研究了切除眼柄48h對凡納濱對蝦鰓絲離子調節(jié)信號轉導通路中鰓絲三種生物胺、鰓絲cAMP和cGMP以及鰓絲三種離子轉運酶活力的變化。結果顯示,切除眼柄對凡納濱對蝦鰓絲3種生物胺含量、cGMP含量和三種離子轉運酶血淋巴DA含量呈下降趨勢,48h時顯著低于對照組(p<0.05)；切眼組NE含量在48h內呈峰值變化,于

5、12h時達到最小值,48h時顯著高于對照組(p<0.05),切眼組5-HT含量在48h內呈平穩(wěn)變化的趨勢,48h時與對照組無顯著差異(p>0.05)；交并組DA、NE含量在實驗時間時內呈逐漸下降趨勢,48h時顯著低于對照組水平(p<0.05)；交并組5-HT含量呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,48h時恢復至對照組水平。切眼組cAMP含量48h內呈現(xiàn)峰值變化,12h時達到最低值后逐漸上升,48h時恢復至對照組水平,切眼組cGMP含量呈下降趨勢,2

6、4h時達到最低值后逐漸穩(wěn)定,48h時顯著低于對照組水平(p<0.05)；交并組cAMP、cGMP含量在實驗時間內呈峰值變化,于12h時達到最低值,然后呈上升趨勢,CAMP含量24h后趨于穩(wěn)定,48h后顯著低于對照組水平(p<0.05),cGMP含量48h后恢復至對照組水平。饑餓組葡萄糖含量在實驗時間內呈下降趨勢,48h后與對照組差異顯著(p<0.05)；切眼組葡萄糖含量在實驗時間內呈峰值變化,于24h時達到最低值后升高,48h時顯著高于

7、對照組水平(p<0.05)；交并組葡萄糖含量在實驗時間內呈下降趨勢,48h時顯著低于對照組水平(p<0.05),并趨近于0。本實驗說明,切除眼柄(CHH)后對凡納濱對蝦的血糖代謝有顯著的影響,在不切除眼柄的處理組中,饑餓組的血淋巴生物胺含量和血糖含量都低于對照組,而cAMP和cGMP含量稍高于對照組,在切除眼柄的處理組中,切眼組的各項指標均高于交并組,這說明饑餓能夠刺激細胞中的第二信使,通過傳遞相應的信號來調控相關的控制血淋巴葡萄糖含量