山羊激活素A型受體基因cDNA的克隆及定量表達研究.pdf

1、激活素(activin，ACT)在體內(nèi)發(fā)揮生物學功能時必需借助特異性的受體系統(tǒng)，ACT的信號傳遞是通過在靶細胞膜上結合的兩種類型的受體即Ⅰ型受體和Ⅱ型受體的復合體而進行的，兩種類型的受體均屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶受體家族成員。激活素和Ⅱ型受體結合，使Ⅱ型受體磷酸化進而激活Ⅰ型受體激酶，接著Ⅰ型受體的細胞質(zhì)內(nèi)的功能區(qū)與細胞內(nèi)信號分子Smads等相互作用，進而將信號轉導入細胞核調(diào)節(jié)靶基因的轉錄、表達。
　　 目前國內(nèi)尚無山羊激活素

2、A型受體基因(activin receptor A，ACTR A)cDNA序列的報道，為探討ACTR A在不同組織中的表達，研究ACTR A對不同山羊繁殖力的影響，本實驗以大足黑山羊、南江黃羊和薩能奶山羊為研究對象，參考GenBank發(fā)表的綿羊(Ovis aries)和奶牛(Bos Taurus)ACTR A mRNA序列設計特異性引物，通過RT-PCR方法克隆了山羊ACTR A基因，并對其核苷酸序列、氨基酸序列和蛋白質(zhì)結構進行了分析。

3、同時，采用實時熒光定量PCR技術檢測了三個山羊品種(遺傳資源)在卵泡期內(nèi)心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、卵巢、垂體等7種組織中的ACTRⅠA和ACTRⅡA的表達水平。主要研究結果如下：
　　 1、從山羊卵巢組織中克隆獲得山羊ACTR A基因編碼區(qū)序列(GenBank登錄號：HQ245710、HQ701674)，ACTRⅡA基因編碼區(qū)序列長為1120 bp，ORF1088 bp，編碼342個氨基酸；ACTRⅠ A長為1311 bp，

4、ORF為1256 bp，編碼418個氨基酸。
　　 2、通過對不同山羊品種(遺傳資源)ACTR A編碼區(qū)核苷酸序列進行比對，發(fā)現(xiàn)，山羊ACTRⅡA基因堿基序列與人、牛、綿羊、小鼠的ACTRⅡ A基因相同區(qū)段的同源性分別為95％、98％、99％、93％；ACTRⅠA基因堿基序列與綿羊、牛、野豬、犬、人、小鼠、大鼠的同源性分別為98％、98％、98％、93％、92％、88％、93％。這表明ACTR A在進化過程中保持高度的保守性。<

5、br>　　 3、應用Real-time PCR技術檢測ACTR A在不同組織中的表達，結果顯示該基因在不同品種山羊的心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、卵巢和垂體中都能檢測到。ACTRⅠ和ACTRⅡ在腎臟中含量最高，心、肺中含量最低，各組織中ACTRⅠA與ACTRⅡA呈極顯著正相關(P<0.01)。薩能奶山羊ACTRⅠA含量極顯著高于南江黃羊及大足黑山羊(P<0.01)，南江黃羊、大足黑山羊與薩能奶山羊各組織中ACTRⅡA含量差異不顯著(P>