牦牛BCMO1和BCO2基因的克隆與定量表達(dá).pdf

1、在適應(yīng)高原嚴(yán)寒環(huán)境方面，牦牛脂肪在能量?jī)?chǔ)存、保護(hù)組織、保持體溫及維持機(jī)體脂溶性維生素平衡等方面具有重要作用。在青綠牧草極缺的季節(jié)，牦牛仍然能夠維持體內(nèi)維生素 A的平衡，這與牦牛脂肪富集大量類(lèi)胡蘿卜素直接相關(guān)。已有研究表明牦牛的黃色脂肪是由脂肪組織中的β-胡蘿卜素富集所致，那么，牦牛的黃脂以及特殊的代謝途徑也很有可能與β-胡蘿卜素的富集能力有關(guān)。本文選取了參與β-胡蘿卜素代謝的相關(guān)酶基因BCMO1基因和BCO2基因?yàn)檠芯繉?duì)象，利用RT-P

2、CR和RACE技術(shù)，克隆得到牦牛的BCMO1基因和BCO2基因全長(zhǎng) cDNA序列，并對(duì)基因結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析；采用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)牦牛營(yíng)養(yǎng)豐盛期和營(yíng)養(yǎng)匱乏期牦牛 BCMO1基因和 BCO2基因 mRNA的表達(dá)差異。結(jié)果顯示：BCMO1基因的序列全長(zhǎng)為1916bp，包括開(kāi)放閱讀框（ORF）1644bp，可編碼576個(gè)氨基酸。BCO2基因的全長(zhǎng)序列為2043bp，開(kāi)放閱讀框（ORF）長(zhǎng)度1662bp，編碼553個(gè)氨基酸?；蚪Y(jié)構(gòu)分析

3、發(fā)現(xiàn)，BCMO1基因5＇非編碼區(qū)包含的啟動(dòng)子元件TATA盒保證了基因轉(zhuǎn)錄的正確定位；牦牛BCO2基因在其核苷酸序列發(fā)生了無(wú)義突變，使其編碼的氨基酸殘基發(fā)生了改變，對(duì)于這種改變是否導(dǎo)致了牦牛黃脂的形成還有待進(jìn)一步的驗(yàn)證。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的分析發(fā)現(xiàn)，兩種蛋白都具有 RPE65超級(jí)家族的保守結(jié)構(gòu)，BCMO1是胞漿蛋白，而B(niǎo)CO2是線粒體蛋白。不同的營(yíng)養(yǎng)時(shí)期牦牛BCMO1和BCO2基因mRNA在肌肉、肝臟、肺臟、腎臟、瘤胃、十二指腸、空腸和回腸8個(gè)被

4、檢組織中均有表達(dá)，同一時(shí)期各組織之間的相對(duì)表達(dá)量差異顯著（P<0.05）。其中，BCMO1基因mRNA在不同時(shí)期同一組織中的相對(duì)表達(dá)量呈穩(wěn)定趨勢(shì)，均在牦牛十二指腸中最高（P＜0.05)，在肺臟中最低（P＜0.05)。BCO2基因mRNA在營(yíng)養(yǎng)匱乏期的相對(duì)表達(dá)量在牦牛十二指腸中最高（P＜0.05)，在瘤胃中最低（P＜0.05)；在營(yíng)養(yǎng)豐盛期 BCO2基因 mRNA的表達(dá)量在牦牛肌肉組織中最高（P＜0.05)，在肺臟中最低（P＜0.05)。