毛花獼猴桃果實(shí)抗壞血酸合成酶相關(guān)基因的克隆及定量表達(dá)分析.pdf

1、以毛花獼猴桃（Actinidia eriantha）‘贛獼6號(hào)’品種為試材，對(duì)其果實(shí)發(fā)育期間抗壞血酸（AsA）含量及其合成相關(guān)酶GalLDH與APX含量的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了測(cè)定分析。采用改良氯化鋰沉淀法從果實(shí)中提取RNA，克隆得到了AsA合成酶GalUR、GME和GMP基因的cDNA全長(zhǎng)序列和GPP基因的cDNA序列片段。利用qPCR技術(shù)對(duì)供試品種果實(shí)發(fā)育過程中AsA合成相關(guān)酶基因GME、GMP、GalUR、GPP、GalLDH、GalDH

2、和GGP的表達(dá)特征進(jìn)行了分析，研究結(jié)果可為解析毛花獼猴桃果實(shí)AsA富集的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.對(duì)毛花獼猴桃‘贛獼6號(hào)’整個(gè)發(fā)育期間果實(shí)AsA水平的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了測(cè)定與分析，AsA含量在果實(shí)發(fā)育前期快速積累，盛花后53d(Days After Full Blossom,DAFB)達(dá)到最高值（22.43mg/g），DAFB112d時(shí)AsA含量不斷下降至7.65mg/g，此后AsA的形成和降解達(dá)到平衡，積累量

3、基本不變，成熟期的AsA含量穩(wěn)定在6.56mg/g。GalLDH酶活性在果實(shí)發(fā)育至成熟的過程中始終保持較高的水平，在DAFB53d時(shí)活性最強(qiáng)，達(dá)到1.95U/g FW。毛花獼猴桃果實(shí)發(fā)育后期APX酶活性較高，果實(shí)成熟期APX酶活性最強(qiáng)(1.957U/g FW)。
　　2.GalUR、GME與GMP基因的cDNA與其他植物中的該基因分別都有較高的同源性。測(cè)序結(jié)果表明克隆得到的GalUR基因cDNA全長(zhǎng)為1031bp，共編碼322個(gè)氨

4、基酸。該基因與美味獼猴桃（ADB85571.1）中的GalUR1同源性為95％。AsA合成酶GME基因序列長(zhǎng)為1139bp，編碼376個(gè)氨基酸，與美味獼猴桃（Actinidia deliciosa）及山梨獼猴桃（Actinidia rufa）的GME氨基酸同源性均為98%；GMP序列長(zhǎng)為1392bp，編碼361個(gè)氨基酸，與闊葉獼猴桃GMP基因氨基酸同源性達(dá)97%。
　　3.利用qPCR技術(shù)對(duì)毛花獼猴桃‘贛獼6號(hào)’果實(shí)發(fā)育過程中As

5、A合成相關(guān)酶基因GMP、GME、GGP、GPP、GalDH、GalLDH和GalUR的表達(dá)進(jìn)行了分析。GalUR基因在果實(shí)發(fā)育過程中的相對(duì)表達(dá)量前期先上升后期逐漸下降，與AsA含量變化趨勢(shì)一致，表明D-半乳糖醛酸途徑可能存在于毛花獼猴桃的AsA合成中。GME與GMP基因的相對(duì)表達(dá)量在前期DAFB34d至DAFB53d內(nèi)劇烈上升，隨后逐漸降低。GPP、GalDH、GalLDH基因表達(dá)量的趨勢(shì)類似，在發(fā)育起始期（DAFB34d）的表達(dá)量最大