黃金梨果實(shí)ACC合成酶基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、黃金梨(Pyruspyrifoliacv.Whangkeumbae),屬砂梨系統(tǒng),品質(zhì)優(yōu)良,為我國主栽品種之一。但是,其果實(shí)不耐貯藏,采摘后在常溫貯存或冷藏條件下易失水、腐爛、黑心,從而失去商品價(jià)值,并伴隨產(chǎn)生許多其他問題。因此若能在黃金梨果實(shí)成熟階段通過調(diào)控對(duì)果實(shí)成熟產(chǎn)生影響的因子,進(jìn)而延緩果實(shí)衰老,對(duì)提高其耐貯性,延長(zhǎng)貨架期具有一定意義。
　　 本試驗(yàn)以黃金梨(Pyruspyrifoliacv.Whangkeumbae)不同

2、成熟期果實(shí)為試驗(yàn)材料,克隆得到黃金梨果實(shí)ACC合成酶基因序列,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法,檢測(cè)了ACC合成酶基因在不同成熟期黃金梨果實(shí)中的相對(duì)表達(dá)量變化,從分子水平進(jìn)一步對(duì)乙烯合成過程進(jìn)行研究,為接下來的遺傳轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ),更好的對(duì)乙烯合成過程進(jìn)行調(diào)控。從而達(dá)到延長(zhǎng)黃金梨貯藏期,貨架期的目的。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、針對(duì)黃金梨果實(shí)富含水分,多酚多糖等次生代謝物質(zhì)的特點(diǎn),比較TAKARAplantt

3、issue法、TIANGENRNAplantplusReagent法、改良3％CTAB法這三種方法在的優(yōu)缺點(diǎn),依據(jù)具體情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,最終確定以TIANGENRNAplantplusReagent法作為黃金梨果實(shí)總RNA的提取方法。該方法提取效果好,可有效去除多酚多糖等物質(zhì)的干擾且總RNA質(zhì)量較高。
　　 2、根據(jù)已發(fā)表的早生新水中獲得的ACC合成酶基因設(shè)計(jì)引物,對(duì)黃金梨果實(shí)中的ACC合成酶基因進(jìn)行克隆,通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)