采后梨果實(shí)糖代謝及酸性轉(zhuǎn)化酶基因克隆表達(dá)的研究.pdf

1、論文以采后黃冠梨果實(shí)為試驗(yàn)材料，采用2％CaCl2和1％普魯蘭多糖涂膜處理，研究不同處理對(duì)梨果實(shí)貯藏期間糖代謝及相關(guān)酶活性的影響，同時(shí)克隆糖代謝關(guān)鍵酶酸性轉(zhuǎn)化酶的基因(AIV)并進(jìn)行表達(dá)分析，為進(jìn)一步闡明采后梨果實(shí)糖代謝機(jī)理，從分子水平揭示果實(shí)風(fēng)味品質(zhì)機(jī)制以及進(jìn)行梨果實(shí)品質(zhì)改良奠定基礎(chǔ)，具有較高的理論和生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值。
　　 本研究?jī)?yōu)化了梨果實(shí)糖類(lèi)高效液相色譜分析條件。流動(dòng)相：乙腈(色譜純)：超純水，檢測(cè)器：RID示差檢測(cè)器，柱溫

2、：35℃，流速：1.0mL/min。
　　 不同處理對(duì)梨果實(shí)生理生化指標(biāo)影響的研究表明：普魯蘭多糖處理和鈣處理均能明顯抑制采后梨果實(shí)的呼吸作用，延緩果實(shí)可滴定酸和總可溶性固形物含量的下降，進(jìn)而延緩梨果實(shí)的后熟和衰老進(jìn)程，改善梨果實(shí)的采后品質(zhì)。
　　 不同處理對(duì)糖代謝及其相關(guān)酶活性影響的研究表明：普魯蘭多糖處理和鈣處理均能顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)地延緩AJ、NI、SS和SPS活性的下降。綜合分析各種感官

3、及理化指標(biāo)，鈣處理可以應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中維持梨果實(shí)貯藏期間的優(yōu)良品質(zhì)。
　　 采后梨果實(shí)糖含量的變化是多種酶共同作用的結(jié)果。相關(guān)性分析結(jié)果表明，作為梨果實(shí)糖代謝的相關(guān)酶，AI、NI、SS、SPS在黃冠梨果實(shí)糖代謝的過(guò)程中均具有重要的功能，其中，AI和SS是黃冠梨果實(shí)糖代謝的關(guān)鍵酶。
　　 梨富含多糖和酚類(lèi)物質(zhì)，RNA提取難度較大，本研究在傳統(tǒng)CTAB法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)。結(jié)果表明：采用改進(jìn)CTAB法提取的RNA完整性好、條

4、帶清晰、無(wú)明顯降解，且28S和18S RNA的亮度比約為2:1，A260/A280為1.913。
　　 根據(jù)GenBank中登錄的酸性轉(zhuǎn)化酶基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，以RNA逆轉(zhuǎn)錄后得到的cDNA為模板，通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增獲得長(zhǎng)度為429bp的酸性轉(zhuǎn)化酶基因片段。核酸序列同源性檢索表明，AIV與砂梨(BAG30919.1)的PsS-AIV1司源性為95％，與葡萄(AAB47171.1)的GIN1同源性為83％。
　　 采