大豆細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)化酶基因GmCInv的克隆及功能分析.pdf

1、菜用大豆是一種重要的豆類蔬菜，指處于鼓粒末期（R6-R7）籽粒飽滿，莢和籽粒翠綠色，但籽粒尚未完全成熟的大豆。食味品質(zhì)是菜用大豆的重要品質(zhì)要素，籽粒的蔗糖含量是食味品質(zhì)中的甜味因子。本研究以菜用大豆品種“南農(nóng)菜豆6號(hào)”為材料，克隆了編碼大豆細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)化的基因GmCInv，并對(duì)基因的表達(dá)模式及功能進(jìn)行初步分析，旨在了解這些基因?qū)M織中蔗糖分解及植物生長(zhǎng)發(fā)育的影響。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.GmCInv基因的克隆及序列分析
　　

2、以編碼擬南芥細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)化酶基因AtCInv1（登錄號(hào):AM230708）序列為探針，通過電子克隆方法，從菜用大豆中克隆得到編碼大豆細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)化酶GmCInv基因。序列分析發(fā)現(xiàn)GmCInv包含一個(gè)長(zhǎng)為1，956 bp的開放閱讀框，編碼652個(gè)氨基酸，推測(cè)蛋白質(zhì)的分子量是73.88kD。GmCInv與毛果楊細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)化酶Ptinv氨基酸序列相似性達(dá)到88％。
　　2.GmCInv基因的表達(dá)特性分析
　　利用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)GmCInv

3、基因的組織特異性進(jìn)行分析和誘導(dǎo)處理大豆GmCInv的表達(dá)模式分析。結(jié)果顯示，GmCInv分別在大豆幼苗期的葉片中和開花期的花中表達(dá)量最高，在根、莖中表達(dá)量較低。在葉片中，NaCl和PEG處理影響GmCInv基因的表達(dá)，隨著處理時(shí)間延長(zhǎng)，表達(dá)量上調(diào)，并在處理6h時(shí)，表達(dá)量達(dá)到最大，為處理前的12倍，之后基因的表達(dá)量下調(diào)。該基因在根部中的表達(dá)沒有顯示出穩(wěn)定的變化規(guī)律。
　　3.GmCInv轉(zhuǎn)基因擬南芥的功能分析
　　將GmCIn