枳中性轉(zhuǎn)化酶基因PtrNINV克隆及其功能分析.pdf

1、低溫脅迫給柑橘產(chǎn)業(yè)帶來(lái)非常嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此，提高柑橘抗低溫脅迫的能力具有重要的意義。轉(zhuǎn)基因技術(shù)是一種重要的育種途徑，其前提是獲得一些候選基因。本實(shí)驗(yàn)室建立了枳的低溫基因表達(dá)文庫(kù)，從中篩選出一些基因，包括PtrNINV。從枳中克隆該基因全長(zhǎng)cDNA，構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，預(yù)測(cè)亞細(xì)胞定位。分析它在不同脅迫條件和外源物質(zhì)處理下的表達(dá)模式，構(gòu)建表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化的方法將導(dǎo)入模式植物煙草中，獲得轉(zhuǎn)基因植株，對(duì)轉(zhuǎn)基因株系在低溫、高鹽脅迫下

2、的抗性進(jìn)行分析，以鑒定該基因在抗逆方面的功能。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.克隆了枳PtrNINV基因的全長(zhǎng)cDNA序列，包含2037 bp的開(kāi)放閱讀框，編碼678個(gè)氨基酸。進(jìn)化樹(shù)分析，其親緣關(guān)系與胡蘿卜相近。亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)分析，它可能定位于線粒體中。
　　 2.實(shí)時(shí)定量PCR分析PtrNINV基因在高鹽、低溫、脫水不同脅迫和ABA、蔗糖、葡萄糖處理下的表達(dá)。結(jié)果表明，該基因能被以上處理誘導(dǎo)，但是它在不同的脅迫和處理?xiàng)l件

3、下卻具有不同的表達(dá)模式，干旱、鹽、葡萄糖處理時(shí)，其表達(dá)量先降低，隨后又逐漸升高，4℃低溫和外源ABA、蔗糖處理時(shí)，具有相反的表達(dá)趨勢(shì)。幾種脅迫處理中，該基因?qū)Φ蜏睾望}脅迫的響應(yīng)最明顯。
　　 3.構(gòu)建了PtrNINV-pB I121雙元表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化煙草，共鑒定出56株轉(zhuǎn)基因植株。在7#、8#、22#、39#株系中超量表達(dá)。對(duì)7#、22#、39#三個(gè)株系和野生型株系(WT)的T1代進(jìn)行500 mmol/LNa