碭山酥梨果實(shí)PAL酶學(xué)特性的研究及PAL基因克隆.pdf

1、碭山酥梨(Pyrus bretschneideri cv.)原產(chǎn)安徽省碭山縣，是我國(guó)梨的主栽品種和主要出口品種之一。但是由于近年來(lái)管理不善、品種退化等原因，使得石細(xì)胞含量明顯增加，肉質(zhì)變粗、多渣，口感變差，嚴(yán)重降低了碭山酥梨的品質(zhì)及其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。因此，通過(guò)生物學(xué)等手段降低石細(xì)胞含量，提高碭山酥梨品質(zhì)，以增強(qiáng)碭山酥梨市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力成為亟待解決的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)以碭山酥梨果實(shí)為材料，研究碭山酥梨果實(shí)發(fā)育過(guò)程中石細(xì)胞含量、木質(zhì)素含量及木質(zhì)素合成關(guān)鍵酶苯

2、丙氨酸解氨酶(PAL)活性變化，找到梨石細(xì)胞發(fā)育與PAL的關(guān)系。并對(duì)PAL的酶學(xué)特性進(jìn)行研究，以期了解梨PAL的性質(zhì)，同時(shí)克隆PAL基因，為從生理生化及分子生物學(xué)水平調(diào)控碭山酥梨石細(xì)胞發(fā)育提供理論基礎(chǔ)，主要研究結(jié)果如下：
　　 1、通過(guò)對(duì)五種梨果實(shí)切片觀察發(fā)現(xiàn)碭山酥梨、貢梨和豐水梨石細(xì)胞團(tuán)較大，分布較密集；碭山酥梨石細(xì)胞團(tuán)最大，分布最密集；庫(kù)爾勒香梨石細(xì)胞團(tuán)較小，分布較疏散。蘋果梨，石細(xì)胞團(tuán)最小，分布最疏散。
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3、在碭山酥梨果實(shí)整個(gè)發(fā)育過(guò)程中，石細(xì)胞含量于花后51天出現(xiàn)高峰，高峰值為17.83％;木質(zhì)素含量于花后47天和花后63出現(xiàn)兩個(gè)高峰，峰值分別為6.47％和7.00％;PAL活性最大值出現(xiàn)在花后27天，最大值為85.53U/g·h。三者高峰期的出現(xiàn)在時(shí)間上表現(xiàn)出一定的時(shí)序性，PAL活性的高峰期最先出現(xiàn)，然后木質(zhì)素含量出現(xiàn)高峰期，石細(xì)胞含量的高峰期最后出現(xiàn)。它們?nèi)叩淖兓厔?shì)基本相同，總體上均呈先升高后下降的趨勢(shì)，且三者之間均呈顯著正相關(guān)。<

4、br>　　 3、碭山酥梨果實(shí)PAL的最適pH為9.2;在pH9.0左右時(shí)穩(wěn)定性較高；用pH4.0和pH10.0的緩沖液處理均導(dǎo)致酶分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，活性降低；PAL最適反應(yīng)溫度為60℃左右，較耐熱；當(dāng)反應(yīng)時(shí)間在180min內(nèi)PAL的活性與反應(yīng)時(shí)間呈線性關(guān)系；PAL對(duì)L-苯丙氨酸有較高的專一性，對(duì)L－酪氨酸也表現(xiàn)出一定的活性；最適底物濃度為0.0004～0.0012mol/L;碭山酥梨果實(shí)PAL的Km值有兩個(gè)，Km1為0.7500mmo