柱花草防御酶活性變化、PAL基因的克隆與表達分析.pdf

1、柱花草(Stylosanthesspp.)是一種優(yōu)良的熱帶豆科牧草。目前，柱花草己在我國華南熱帶、亞熱帶地區(qū)進行了大面積種植和推廣。然而，柱花草炭疽病(Styloanthracnose)的發(fā)生和流行限制了柱花草的進一步利用。Mineirao柱花草是一種高度抗炭疽病的品種，已在巴西得到了大面積的推廣種植，有關研究人員已經(jīng)對Mineirao柱花草的抗病機理進行了初步研究，從中克隆出MSRA基因，但目前對Mineirao柱花草抗病機理尚不清楚

2、。 利用植株葉片接種技術對抗病Mineriao、感病CIAT2312柱花草接種炭疽病病原菌，對葉片中的3種酶PAL、PPO、SOD的活性進行測定。結果表明，接種后兩種柱花草種質3種酶活性均先升后降，抗病品種增加高于感病品種，這三種酶的活性與柱花草對炭疽病的抗性密切相關，通過檢測酶活的變化可作為抗病性鑒別的一個指標。 本實驗利用RT-PCR法結合RACE技術，從Mineirao柱花草中成功克隆出PAL基因全長cDNA序列，

3、最大閱讀框2154bp。 本研究通過對不同柱花草種質對炭疽病的抗性鑒定，在驗證了PAL在Mineirao柱花草抗炭疽病方面起一定作用的基礎上克隆出PAL基因，利用半定量RT-PCR檢測該基因在兩種柱花草中的差異性表達，分析表明，Mineirao表達量高于CIAT2312柱花草，推測出該基因與抗炭疽病有關。 在PAL基因的編碼框以啟始密碼子ATG和終止密碼子TAG為兩端設計一對特異引物，分別在引物5’端引人XbaI和Xma