柑橘轉化酶基因家族成員的分離及表達研究.pdf

1、浙江大學博士學位論文柑橘轉化酶基因家族成員的分離及表達研究姓名：安新民申請學位級別：博士專業(yè)：果樹學指導教師：張上隆2002.5.1浙江大學博士學位論文：柑橘轉化酶基固家族成員的分離及表選研充( 2 0 0 2 )中文摘要柑橘是我國重要果品之一。近年來我國水果產(chǎn)量全面增長，果品購銷迅速從賣方市場轉向買方市場，特別是隨著我國加入W T O ，柑橘將面臨市場國際化的激烈競爭，提高柑橘果實品質已是追在眉睫。含糖量是柑橘果實品質構成的重要指標之

2、一，而且糖是酸、類胡蘿h 素和其它營養(yǎng)成分及芳香物質合成的基礎原料。而轉化酶是蔗糖代謝的關鍵酶，它包括幾種同工酶，參與蔗糖在柑橘果實的源庫分配，調控細胞分化和膨大以及發(fā)育，決定果實中糖的成分及比例，還參與對機械傷、病菌侵染和寒冷的響應過程等。因此研究柑橘轉化酶相關基因具有重要的意義，可以從分子水平理解柑橘果實蔗糖積累與分解的分子機制，為通過基因工程改良柑橘品質和科學調控果實品質奠定基礎。本研究根據(jù)G e n B a n k 登記的植物液

3、泡和細胞壁轉化酶基因序列的保守區(qū)設計了4 對P C R 引物，采用我們改進的濾紙吸附噬菌體一P C R 法篩選甜橙九噬菌體文庫；分別以溫州蜜柑、金柑和酸橙基因組D N A 為模板進行P C R 獲得相關的轉化酶基因成員的片段；運用S e qA i d I I 、C l u s t a l x 和B i o e d i t 軟件包對獲得的轉化酶基因家族的7 個序列進行了同源性分析和聚類分析；對不同成員進行了S o u t h e r n

4、雜交分析；以金柑、酸橙為材料進行了轉化酶基因的特異性表達的初步研究一主要結果如下：1 ．從甜橙基因組文庫中篩選分離了甜橙液泡酸性轉化酶基因全長序列( C S —V 1 1 ) ，該序列全長6 9 4 2 b p ，包括1 個類似轉錄因子、啟動子序列、0 R F和下游序列，編碼5 8 8 個氨基酸( 圖4 ) ，該基因包括6 個外顯子和5 個內含子，其中第2 個外顯子僅9 b p ，編碼3 個氨基酸( D P N 即天冬氨酸、脯氨酸和天冬

5、酰胺) ，是迄今為止在植物界發(fā)現(xiàn)的最小的外顯子。該基因與植物液泡轉化酶基因同源性較高，推測定位于液泡，屬于甜橙液泡酸性轉化酶基因( C S —V 1 1 ) 。2 ．從甜橙基因組文庫中篩選分離了甜橙細胞壁酸性轉化酶基因( C S - C W l l ) ，己測定序列長3 0 7 3 b p ，該序列編碼2 8 1 個氨基酸，包括3 個內含子和2 個外顯其中第1 個外顯子僅9 b p ，編碼D P N ( 天冬氨酸、脯氨酸和天冬酰胺) ，