桃果實(shí)果膠裂解酶基因PpPLs的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、C l o n i n g a n d E x p r e s s i o n A n a l y s i s o fP e c t a t eL y a s e G e n e P p P L s o f P e a c hF r u i t‘’、1 ’s u b m i t t e dt 0 1n e s t sS b m l t t e t oQ i n g d a o A g r i c u l t u r a l U n i

2、v e r s i t yI nF u l f i l l m e n t o f t h eR e q u i r e m e n tf o rt h eD e g r e e o fM a s t e r o f A g r o n o m y 1 一 一Y u a n C h e n g l o n g( D e p a r t m e n t o f H o r t i c u l t u r e )S u p e r v i

3、s o r ：D o n gX i a o y i n g ；D u a n Y a n x i nQ i n g d a o ．C h m aJ u n e ，2 0 1 3青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要摘要桃果實(shí)是典型呼吸躍變型果實(shí)，采后軟化進(jìn)程迅速，掌握桃果實(shí)成熟軟化的分子機(jī)理，有望在較短時(shí)間內(nèi)培育出品質(zhì)更加優(yōu)良的硬肉桃品種，這對提高果實(shí)綜合品質(zhì)、增強(qiáng)我國水果的市場競爭力具有重要意義。本研究以硬肉桃新品種‘雙久紅’果實(shí)為試材，

4、以常規(guī)優(yōu)良品種‘川中島’為對照，研究了果實(shí)采后貯藏期間質(zhì)地變化；同時(shí)，克隆了4 個(gè)果膠裂解酶P p P L s 基因，利用實(shí)時(shí)定量R e a l - T i m e R T - P C R 技術(shù)分析了這些基因在果實(shí)成熟前后過程中及采后貯藏期間的動態(tài)表達(dá)，并研究了不同激素處理對這些基因表達(dá)的影響，主要研究結(jié)果如下：1 ．T P A 質(zhì)構(gòu)分析桃果實(shí)貯藏期間質(zhì)地變化應(yīng)用T P A 測試法，對硬肉桃‘雙久紅’及其母本‘川中島’果實(shí)在貯藏期間的質(zhì)

5、地變化進(jìn)行分析表明：硬肉桃‘雙久紅’果實(shí)的硬度，粘力，粘性，咀嚼性均顯著高于“川中島”的；而硬度形變量與對照的呈相反的變化趨勢。相關(guān)性分析表明，果實(shí)粘力、粘性、咀嚼性與硬度都具有極顯著的相關(guān)性，而硬度形變量與硬肉桃果實(shí)硬度呈極顯著負(fù)相關(guān)，與軟肉桃果實(shí)硬度呈極顯著正相關(guān)，說明這些指標(biāo)可用于檢測果實(shí)質(zhì)地變化。乙烯利( 5 0 m g ／L ) 、N A A ( 5 0 m g ／L ) 和A B A ( 5 0 m g ／L ) 均不同程度

6、促進(jìn)了兩品種桃果實(shí)的軟化，乙烯利和N A A 處理促進(jìn)了乙烯的釋放，A B A 處理抑制了‘雙久紅’桃果實(shí)中乙烯的釋放。2 ．桃果實(shí)中P p P L s 基因的克隆根據(jù)G e n B a n k 登錄的桃P p P L s 基因序列P p P L I ( E F 5 6 8 7 8 0 ．1 ) 和P p P L 2 ( G U 4 6 2 1 2 7 ．1 ) ，在兩品種桃果實(shí)中成功克隆到P p P L l 和P p P L 2 基因

7、。又根據(jù)本課題組已構(gòu)建的S S H 文庫進(jìn)行差異篩選得到的1 條桃果膠裂解酶的e D N A 片段，通過電子克隆獲得一條長度為1 7 3 4 b p 的片段，暫命名為P p P L 3 , 其O R F 為1 6 9 2 b p ，編碼5 6 3 個(gè)氨基酸；根據(jù)已知序列( B U 0 4 2 0 3 8 ．1 ) 克隆得到一條長度為1 4 4 1 b p 的片段，暫命名P p P L 4 , 其O R F 為1 1 2 8 b p ，編

8、碼3 7 5 個(gè)氨基酸。3 ．桃果實(shí)中P p P L s 基因的實(shí)時(shí)定量表達(dá)組織特異性表達(dá)分析表明，‘川中島’中4 個(gè)P p P L 基因可能與雌雄蕊發(fā)育有關(guān)，在‘雙久紅’果實(shí)中，則可能與幼果的發(fā)育密切相關(guān)。成熟過程中，P p P L l 和P p P L 2 表達(dá)水平較高，起到了重要作用，尤其是‘川中島’中，P p P L l 和P p P L 2 協(xié)同作用加快了果實(shí)成熟軟化。‘雙久紅’桃果實(shí)的軟化可能與P p P L 3和P p P