熱處理提高桃果實(shí)耐冷性的機(jī)理研究及相關(guān)磷脂酶D基因的電子克隆.pdf

1、桃是我國(guó)黃河與長(zhǎng)江流域主要果品之一，屬于典型的呼吸躍變型果實(shí)，不易保鮮，不耐貯藏，且對(duì)低溫非常敏感，在貯運(yùn)過(guò)程中極易發(fā)生冷害，造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。磷脂酶D（phospholipase D，PLD，EC 3.1.4.4）是植物組織中普遍存在的一類磷脂水解酶，幾乎在植物所有的生命階段和對(duì)環(huán)境的應(yīng)答中都起著重要作用。本研究以久保桃（Prunus persica L.Cv.Jiubao）果實(shí)為試材，研究了熱處理誘導(dǎo)采后桃果實(shí)耐冷性與PLD之間的

2、關(guān)系，并克隆了桃果實(shí)PLD基因的全長(zhǎng)序列。本研究有利于明確PLD作用的分子細(xì)胞學(xué)機(jī)理，能夠?yàn)榭刂铺夜麑?shí)冷害提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴38℃熱空氣處理2 d，能夠明顯抑制低溫貯藏過(guò)程中桃果實(shí)相對(duì)電導(dǎo)率和MDA含量的升高，減輕果實(shí)冷害。在熱處理初期桃果實(shí)PLD和SA被激活，Western分析證實(shí)熱處理對(duì)PLD的激活作用是通過(guò)增加其蛋白表達(dá)量來(lái)實(shí)現(xiàn)的。由此可見(jiàn)，PLD信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)和SA 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的激活是果實(shí)響應(yīng)溫度

3、變化的前期反應(yīng)。但對(duì)于PLD或其水解產(chǎn)物如何作為上游信號(hào)參與熱處理誘導(dǎo)桃果實(shí)耐冷性的產(chǎn)生，以及該過(guò)程中PLD信號(hào)途徑與SA 信號(hào)途徑的關(guān)系仍需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
　　 ⑵基于BLAST搜索，從桃基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選到一個(gè)新的磷脂酶D基因序列（PPA001528M），并進(jìn)行了RT-PCR驗(yàn)證。該基因具有完整的開(kāi)放閱讀框（2424 bp），編碼807個(gè)氨基酸。多序列比對(duì)顯示，該基因編碼的氨基酸序列與番茄、草莓、葡萄等物種的磷脂酶D氨基