巴戟天優(yōu)良材料篩選與組培快繁技術(shù).pdf

1、目前,隨著生活水平的日益提高,人們?cè)絹碓街匾曌陨淼谋＝?中藥材以其較小的副作用越來越受到人們的青睞。巴戟天作為四大南藥之一,是中藥材中常用的品種之一,其主要成分為葸醌類化合物、糖類、有機(jī)酸類、氨基酸類、環(huán)烯醚萜類以及人體所必須的微量元素,具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕、抗抑郁等功效。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展以及對(duì)巴戟天開發(fā)不斷深入,巴戟天的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大,市場(chǎng)需求量逐年增加。由于長(zhǎng)期的濫采濫挖,巴戟天野生資源受到較大的破壞,而巴戟天栽培

2、種的產(chǎn)量和質(zhì)量不能滿足市場(chǎng)的需要。本研究對(duì)篩選出的巴戟天優(yōu)良材料進(jìn)行組織培養(yǎng)苗木快速繁殖研究,為保護(hù)巴戟天野生種質(zhì)資源及實(shí)現(xiàn)巴戟天的工廠化育苗提供技術(shù)支撐,進(jìn)而促進(jìn)巴戟天中藥材的現(xiàn)代化進(jìn)程,具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.巴戟天優(yōu)良材料的篩選。采集長(zhǎng)勢(shì)好、無病蟲害巴戟天單株35株,測(cè)量出巴戟天各單株的藤條長(zhǎng)度、分支數(shù)、地徑、地上、地下生物量;運(yùn)用超聲波法提取巴戟天多糖,苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量。以單株產(chǎn)藥部位產(chǎn)

3、量、多糖含量、多糖總量為主要篩選指標(biāo),其他各生物性狀指標(biāo)為參考,分析比較篩選出巴戟天優(yōu)良單株A1號(hào)A2號(hào)及B1作為優(yōu)良材料用于組培快繁實(shí)驗(yàn)研究。
　　 2.巴戟天無菌體系的建立。此實(shí)驗(yàn)為巴戟天優(yōu)良材料組培實(shí)驗(yàn)的預(yù)實(shí)驗(yàn)。分別從消毒處理、取材月份、取材時(shí)間以及外植體木質(zhì)化程度四個(gè)方面進(jìn)行了研究:(1)采用10種不同消毒方式對(duì)巴戟天莖段外植體進(jìn)行處理,通過對(duì)污染率、褐化率及成活率的統(tǒng)計(jì)分析,實(shí)驗(yàn)表明0.1％升汞8min+2％次氯酸鈉1

4、0min的消毒處理,其污染率42.11％,褐化率21.05％,均比較低,成活率52.63％為所有處理中最高。該處理是巴戟天莖段外植體消毒的最好方法。
　　 (2)研究了采取外植體的月份對(duì)巴戟天消毒處理效果的影響,實(shí)驗(yàn)分別于4月、7月、8月及10月采取巴戟天外植體,采用0.1％升汞8min+2％次氯酸鈉10min消毒處理,研究發(fā)現(xiàn)7月份的成活率最高為56.83％,8月僅次于7月,而4、10月份的成活率低于7至8月份。7月份為巴戟天

5、外植體采集的最佳月份。
　　 (3)研究了取材時(shí)間對(duì)巴戟天消毒處理效果的影響。實(shí)驗(yàn)分別于的陰雨天、晴天上午08:00-10:00點(diǎn)、下午的14:00-15:00以及連續(xù)3天及以上無雨的14:00-15:00采集巴戟天外植體,采用0.1％升汞8min+2％次氯酸鈉10min消毒處理,研究結(jié)果表明連續(xù)3天及以上無雨的14:00-15:00采取莖段外植體培養(yǎng),污染率最低,成活率最高,達(dá)到48.89％。連續(xù)晴朗3天及以上的午后取材為宜。

6、
　　 (4)研究了巴戟天莖段的木質(zhì)化程度對(duì)外植體消毒效果的影響。分別將巴戟天莖段外植體分為三個(gè)外植體木質(zhì)化程度,采用0.1％升汞8min+2％次氯酸鈉10min消毒處理,研究結(jié)果表明未木質(zhì)化莖段外植體培養(yǎng)污染率最低但褐化率最高,完全木質(zhì)化莖段外植體培養(yǎng)污染率最高而褐化率最低,半木質(zhì)化莖段外植體培養(yǎng)成活率最高,達(dá)43.48％。巴戟天莖段外植體以半木質(zhì)化的材料為佳。
　　 3.巴戟天優(yōu)良材料的組培快繁。本研究從巴戟天無菌體

7、系的建立、不定芽誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、壯苗、生根誘導(dǎo)、煉苗移栽等方面對(duì)巴戟天優(yōu)良材料進(jìn)行了研究。
　　 (1)將巴戟天優(yōu)良材料的半木質(zhì)化莖段采用0.1％升汞8min+2％次氯酸鈉10min的消毒方法進(jìn)行消毒處理,之后接入改良MS培養(yǎng)基中,以建立起巴戟天優(yōu)良材料的無菌體系。15d后成活率為42.1％,成活率高。
　　 (2)在6-BA的濃度分別為0.5mg/L、1.0mg/L和2.0mg/L,IBA的濃度分別為0.025mg/L

8、、0.05mg/L和0.1mg/L,培養(yǎng)基類型為改良MS的正交設(shè)計(jì)的巴戟天不定芽誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中,當(dāng)6-BA濃度為1.0mg/L,IBA濃度為0.05mg/L時(shí),出芽率79.49％,芽體粗壯,長(zhǎng)勢(shì)較好,為不定芽誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基。
　　 (3)在6-BA濃度分別為0.5mg/L、1.0mg/L和2.0mg/L,IBA濃度分別為0.1mg/L、0.2mg/L和0.5mg/L,NAA濃度分別為O.1mg/L、0.2mg/L和1.0mg/L,

9、培養(yǎng)基類型為改良MS的正交設(shè)計(jì)的巴戟天增殖培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,添加6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L+NAA0.2mg/L增殖系數(shù)最高,達(dá)到7.21,且苗中等粗壯長(zhǎng)勢(shì)良好,是不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基。
　　 (4)在6-BA濃度分別為0.4.mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L,IBA濃度分別為0mg/L、0.1mg/L和0.2mg/L,NAA濃度分別為0mg/L、0.2mg/L和0.4mg/L,培養(yǎng)基類型為改良MS的正交設(shè)

10、計(jì)的巴戟天壯苗實(shí)驗(yàn)中,添加6-BA0.4mg/L+IBA0mg/L+NAA0mg/L,組培苗平均長(zhǎng)高1.988cm,苗顏色深綠,莖稈粗壯,是巴戟天壯苗的最佳培養(yǎng)基。
　　 (5)在IBA濃度分別為0mg/L、0.2mg/L和0.8mg/L,NAA濃度分別為0mg/L、0.2mg/L和0.8mg/L,培養(yǎng)基類型分別為1/2MS、MS和2MS的改良培養(yǎng)基的正交設(shè)計(jì)的巴戟天生根誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中,不添加激素的1/2MS培養(yǎng)基生根率100％,且