魔芋淺層液體組織培養(yǎng)及多倍體誘導(dǎo)研究.pdf

1、本研究以花魔芋和珠芽魔芋為試材進行了魔芋淺層液態(tài)培養(yǎng)體系研究，并結(jié)合淺層液態(tài)培養(yǎng)與秋水仙素溶液浸泡法對魔芋愈傷組織進行了多倍體誘導(dǎo)研究。試驗結(jié)果如下：
　　 ⑴以花魔芋球莖切塊為外植體建立了淺層(深約5mm，約10mL)液態(tài)培養(yǎng)體系。結(jié)果表明，MS+6-BA0.5+NAA0.5+蔗糖3.0％+0.1％PVP(pH5.8)為最優(yōu)初代培養(yǎng)基；MS+6-BA2.0+NAA0.5+蔗糖3.0％+0.1％PVP(pH5.8)與MS+6-B

2、A1.0+NAA0.5+蔗糖3.0％+0.1％PVP(pH5.8)，二者交替培養(yǎng)為最優(yōu)芽分化方案；1/2MS+IAA0.5+蔗糖1.5％+0.1％PVP(pH5.8)為最優(yōu)生根培養(yǎng)基。另外在試材愈傷組織繼代3次后發(fā)現(xiàn)了A型、B型、C型三種愈傷組織，三者在外觀、組織結(jié)構(gòu)和分化能力上存在差異。試驗和生產(chǎn)上選擇A型和B型愈傷組織進行分化培養(yǎng)可得到高效穩(wěn)定的分化體系。
　　 ⑵以珠芽球莖切塊為外植體建立了淺層液態(tài)培養(yǎng)體系。結(jié)果表明，MS

3、+6-BA0.5+NAA0.5+蔗糖3.0％+0.1％PVP(pH5.8)為最優(yōu)初代培養(yǎng)基；MS+6-BA1.5+NAA0.5+蔗糖3.0％+0.1％PVP(pH5.8)與MS+6-BA0.5+NAA0.5+蔗糖3.0％+0.1％PVP(pH5.8)，二者交替培養(yǎng)是最優(yōu)出芽方案，這樣可連續(xù)批量獲得組培苗。生根最優(yōu)培養(yǎng)基為1/2MS+IAA0.5+蔗糖1.5％+0.1％PVP(pH5.8)。在繼代過程中僅見一種外觀乳白色，質(zhì)地疏松的愈傷組

4、織類型，其石蠟切片發(fā)現(xiàn)大量生長中心。
　　 ⑶試驗發(fā)現(xiàn)淺層液態(tài)培養(yǎng)基在防止初代褐變，愈傷組織誘導(dǎo)，芽分化，根分化上均優(yōu)于固態(tài)培養(yǎng)基。在淺層液態(tài)培養(yǎng)體系基礎(chǔ)上進行了花魔芋多倍體誘導(dǎo)試驗。秋水仙素溶液(含二甲基亞砜2％)濃度分別為0.005％、0.01％、0.05％、0.1％，采用浸泡法，浸泡溫度為15℃。結(jié)果表明，隨著秋水仙素濃度和浸泡時間的提高，試材愈傷組織的成活率、分化率均呈下降趨勢，而變異率升后降。試材愈傷組織以0.1％的秋

5、水仙素溶液，在15℃下浸泡2小時，接種于分化培養(yǎng)基成活率為83.3％，分化率為64.0％，變異率41.53％。試驗通過根尖染色體敲片觀察僅發(fā)現(xiàn)了二倍體和四倍體個體。
　　 ⑷根尖染色體敲片結(jié)果表明，誘導(dǎo)的變異植株為四倍體。本試驗進一步研究了四倍體花魔芋的形態(tài)特征。對植株外部形態(tài)特征觀察發(fā)現(xiàn)，四倍體植株矮化，葉片變寬，葉形指數(shù)變小，充分體現(xiàn)了形態(tài)器官的巨大性。魔芋四倍體葉色更加濃綠，葉片下表皮的氣孔及其保衛(wèi)細(xì)胞體積明顯增大，而氣孔