鴨的色素相關(guān)基因ASIP和AGRP的研究.pdf

1、本試驗以番鴨、高郵鴨和櫻桃谷鴨(即英系北京鴨)為研究對象，研究了非傷害性和傷害性毛囊組織取樣法對總RNA提取質(zhì)量的影響，從而為禽類毛囊組織分子生物學的深入研究提供一種新的技術(shù)方法。在此基礎(chǔ)上，克隆了鴨羽色相關(guān)基因刺鼠信號蛋白(Agouti signaling protein，ASIP)和刺鼠相關(guān)蛋白(Agouti-relatedprotein，AGRP)基因的部分序列，同時采用半定量RT-PCR的方法研究了ASIP和AGRP基因在番鴨各

2、組織中的表達規(guī)律。研究結(jié)果如下：
　　 ⑴以番鴨、高郵鴨和英系北京鴨非傷害性取樣法獲得的毛囊組織RNA為模板，用反轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)方法擴增了含有Agouti信號蛋白(ASIP)基因的CDS片段，將其克隆測序，獲得長為308bp的編碼序列。結(jié)果表明，高郵鴨和英系北京鴨所得的部分ASIP基因的CDS序列完全一致，同源性為100％。與GenBank上登陸的原雞及鵪鶉的ASIP對應(yīng)的CDS序列進行比對，番鴨、高郵鴨和

3、英系北京鴨的同源性均在92.53％以上。番鴨、高郵鴨和英系北京鴨ASIP基因的CDS片段編碼102個氨基酸，與原雞和鵪鶉對應(yīng)的氨基酸序列比對同源性均高于92.16％，由此可見禽類的ASIP基因具有高度的保守性，同時也證明了毛囊非傷害性取樣的可行性，為禽類毛囊取樣的方法提供了一種新的參考。所得序列均已傳至GenBank，基因登錄號分別為HM059823和HM059824。
　　 ⑵根據(jù)雞、鵪鶉、綠頭野鴨等AGRP基因同源序列的保守

4、區(qū)設(shè)計引物，用PCR擴增番鴨，高郵鴨和英系北京鴨基因組DNA，回收目的片段，然后克隆測序。番鴨、高郵鴨和英系北京鴨分別擴增出1213bp、1195bp和1196bp的核苷酸序列，包括2個內(nèi)含子、外顯子2、部分外顯子1和部分外顯子3。序列比對發(fā)現(xiàn)鴨與其他雞形目禽種相比，AGRP基因編碼序列和氨基酸序列同源性較高，但在內(nèi)含子2上變異較大，鴨與雞形目物種相比，內(nèi)含子2少200bp左右。序列經(jīng)上傳所得基因登錄號分別為HM059820、HM059

5、821和HM059822。
　　 ⑶利用半定量RT-pCR方法檢測了ASIP基因和AGRP基因在番鴨毛囊、皮膚毛囊、心、肝、脾、肺、腎、骨骼肌、卵巢(♀)、睪丸(♂)、下丘腦、垂體、腎上腺、尾脂腺、脂肪等共15個組織的表達量。發(fā)現(xiàn)ASIP基因在禽類皮膚組織(毛囊和皮膚)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(下丘腦)及其他非皮膚中均有表達。AGRP基因與ASIP基因一樣，在番鴨各組織均存在表達，其中AGRP基因在下丘腦和腎上腺中表達量較高。利用方差分析