癸甲溴銨對褐牙鲆的毒性效應(yīng)及藥效研究.pdf

1、本文研究比較了癸甲溴銨和甲醛兩種消毒劑對褐牙鲆的毒性、藥效方面的差異，并研究了癸甲溴銨對褐牙鲆非特異性免疫、組織酶活力的影響，還初步探討了癸甲溴銨產(chǎn)生細(xì)胞毒性的機制，旨在為癸甲溴銨在水產(chǎn)養(yǎng)殖中推廣及合理使用提供理論依據(jù)。 1.癸甲溴銨和甲醛對褐牙鲆的急性毒性 通過藥浴方式，進行了癸甲溴銨和甲醛對褐牙鲆的急性毒性試驗，并對癸甲溴銨引起的中毒死亡褐牙鲆進行了病理組織學(xué)觀察。結(jié)果表明，在19.0～21.0℃和24.5～25.5

2、℃，癸甲溴銨對褐牙鲆的24h、48h半數(shù)致死濃度(LC<,50>)和安全濃度(Sc)分別為6.35mg/L、4.84mg/L、0.84mg/L和2.43mg/L、2.14mg/L、0.50mg/L；在24.5～25.5℃，甲醛對褐牙鲆的24h、48h半數(shù)致死濃度(LC<,50>)和安全濃度(Sc)分別為413.6mg/L、315.7mg/L、55.2mg/L。通過對中毒死亡褐牙鲆的病理組織學(xué)觀察表明，癸甲溴銨對褐牙鲆的鰓損害最嚴(yán)重，對肝

3、臟、腎臟的損傷相對較輕，特別是對鰓的損傷與魚的死亡有很大的關(guān)系。 2.癸甲溴銨和甲醛的藥效學(xué)研究 采用二倍稀釋法，進行了癸甲溴銨和甲醛對鰻弧菌、副溶血弧菌的體外抑菌試驗；用鰻弧菌L-18株人工感染褐牙鲆，做了癸甲溴銨和甲醛對褐牙鲆細(xì)菌性疾病的防治效果實驗。結(jié)果表明，癸甲溴銨對兩種致病菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)分別為0.25mg/L、0.50mg/L；甲醛對兩種致病菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺

4、菌濃度(MBC)分別為40mg/L、80mg/L；防治效果試驗表明，0.3mg/L癸甲溴銨和50mg/L甲醛藥浴均可有效防治鰻弧菌引起的褐牙鲆細(xì)菌性疾病。以上研究得出，褐牙鲆對甲醛的耐受力很強，但海水魚致病菌對甲醛的耐受力也很強，50mg/L甲醛能對褐牙鲆細(xì)菌性疾病起到防治效果，而癸甲溴銨只需0.3mg/L(低于安全濃度)就能達到相同防病效果，充分體現(xiàn)了癸甲溴銨殺菌濃度低、用量少的特點。 3.癸甲溴銨對褐牙鲆非特異性免疫的影響

5、及病理組織觀察 采用藥浴的方式，研究了癸甲溴銨暴露對褐牙鲆血清溶菌酶和補體旁路激活活力(ACH<,50>)的影響，來探討亞致死量的癸甲溴銨對褐牙鲆非特異性免疫的影響。結(jié)果表明，低劑量(0.5mg/L)癸甲溴銨處理，對溶菌酶活力和ACH<,50>無顯著影響；中劑量(1.0mg/L)處理，在實驗開始能激活溶菌酶和ACH<,50>，隨著作用時間的延長，逐漸呈抑制作用；高劑量組(2.0mg/L)，在短時間(1d)能引起溶菌酶活力和.AC

6、H<,50>提高幅度較大，但很快就開始起抑制作用。由此得出，安全劑量(0.5mg/L)癸甲溴銨對褐牙鲆非特異性免疫不產(chǎn)生明顯影響，隨著癸甲溴銨濃度的增大和作用時間的延長，會引起褐牙鲆血清中溶菌酶和ACH<,50>活力下降，對褐牙鲆非特異性免疫造成損傷。 4.癸甲溴銨對褐牙鲆組織酶活性的影響 采用藥浴的方式，研究了癸甲溴銨暴露對褐牙鲆鰓、肝、腎組織中Na<'+>-K<'+>-ATPase和SOD活性的影響，旨在探討亞致死量

7、的癸甲溴銨對褐牙鲆各組織造成的潛在危害，找出癸甲溴銨攻擊的靶組織及反映褐牙鲆受毒害程度的標(biāo)志酶。結(jié)果表明，低劑量(0.5mg/L)癸甲溴銨處理，短時間(1d)內(nèi)對鰓組織Na<'+>-K<'+>-ATPase活性有顯著性降低作用，但對肝和腎組織中酶活性無明顯影響；高劑量(1.0mg/L、2.0mg/L)癸甲溴銨暴露對鰓、肝、腎組織Na<'+>-K<'+>-ATPase活性均有顯著性抑制作用。低劑量(0.5mg/L)癸甲溴銨處理，短時間(1

8、d)內(nèi)對鰓組織SOD活性有明顯增強作用，但對肝和腎組織SOD活性無明顯影響；1.0mg/L癸甲溴銨暴露，在試驗前期能激活各組織中的SOD活性，隨著處理時間的延長逐漸呈抑制作用；2.0mg/L癸甲溴銨暴露，各組織中SOD活性一直呈下降趨勢。由此可以得出，鰓組織中的酶活性對癸甲溴銨較敏感，可以認(rèn)為鰓是癸甲溴銨攻擊的主要靶組織；鰓組織中Na<'+>-K<'+>-ATPase對癸甲溴銨最為敏感，可以將其作為反映癸甲溴銨對褐牙鲆損傷程度的標(biāo)志酶。

9、5.癸甲溴銨對褐牙鲆頭腎巨噬細(xì)胞胞內(nèi)[Ca<'2+>]；與呼吸爆發(fā)的影響從褐牙鲆頭腎中分離巨噬細(xì)胞，培養(yǎng)在有鈣介質(zhì)的L-15培養(yǎng)基中，體外暴露癸甲溴銨后，分別研究了癸甲溴銨對巨噬細(xì)胞胞內(nèi)[Ca<'2+>]<,i>、呼吸爆發(fā)和細(xì)胞成活率的影響，并用Thapsigargin(Thaps)研究了癸甲溴銨的升鈣機制。結(jié)果表明，癸甲溴銨刺激能提高巨噬細(xì)胞胞內(nèi)鈣水平，在癸甲溴銨加入的第2分鐘到達峰值，用Thaps來預(yù)處理細(xì)胞后，癸甲溴銨引起的胞內(nèi)[

10、Ca<'2+>]<,i>的提高會得到明顯抑制；癸甲溴銨刺激能提高巨嗜細(xì)胞呼吸爆發(fā)強度，在癸甲溴銨加入的第3分鐘達到峰值；細(xì)胞成活率試驗結(jié)果表明，在癸甲溴銨(0.6和1.0mg/L)刺激的第2分鐘和第3分鐘，有明顯的細(xì)胞死亡現(xiàn)象。得出結(jié)論：癸甲溴銨能通過胞外鈣內(nèi)流和激發(fā)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫來提高胞內(nèi)[Ca<'2+>]<,i>，胞內(nèi)[Ca<'2+>]<,i>的提高能通過一系列信號傳導(dǎo)過程使細(xì)胞進入呼吸爆發(fā)狀態(tài)，產(chǎn)生大量的活性氧，過量的活性氧和胞內(nèi)