福建杜鵑花遺傳多樣性ISSR分析及其離體保存.pdf

1、本研究收集了7份杜鵑花科花卉資源,以九仙山野生丁香杜鵑葉片為外植體,建立了杜鵑花科花卉的離體再生體系。并以二喬杜鵑試管苗為材料,通過(guò)限制生長(zhǎng)保存方法研究杜鵑花離體保存,期望為杜鵑花科花卉離體再生體系的建立以及離體種質(zhì)保存提供科學(xué)資料；利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)在福建收集的15份杜鵑材料進(jìn)行遺傳多樣性分析。并對(duì)旗山國(guó)家森林公園的兩個(gè)馬銀花群體進(jìn)行群體多態(tài)性分析。主要研究結(jié)果有:
　　 1.杜鵑花科花卉離體再生體系的建立以九仙山野生

2、丁香杜鵑葉片為外植體,分別研究其消毒、愈傷誘導(dǎo)、愈傷誘導(dǎo)不定芽、試管苗增殖、試管苗生根的最佳條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到:最佳消毒方法為75％酒精(20s)+0.1％的HgCl2(4 min)+無(wú)菌水+0.1％的HgCl2(4 min)；最佳愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1／4MS+1.0mg／L TDZ+0.10 mg／LNAA,誘導(dǎo)率達(dá)到95.58％;最佳誘導(dǎo)不定芽培養(yǎng)基為1／4MS+1.0 mg／LZT+0.05 mg／L,分化率達(dá)到90.67％；最佳增

3、殖培養(yǎng)基為1／4MS+1.5 mg／L ZT+0.1 mg／L,增值系數(shù)達(dá)到8.2；最佳生根培養(yǎng)基為1／2WPM+NAA1.0+IBA0.05,生根率達(dá)到85.1％。
　　 2.杜鵑花科花卉試管苗離體保存的研究選取二喬杜鵑生長(zhǎng)2個(gè)月左右試管苗為供試材料,探討不同濃度的瓊脂、蔗糖、B9、不同培養(yǎng)基成分及不同光照強(qiáng)度等因素對(duì)試管苗限制生長(zhǎng)保存的影響,試驗(yàn)結(jié)果表明:在1／6MS培養(yǎng)基中添加50g／L蔗糖與9.5g·L-1瓊脂濃度保存效

4、果較好,保存8個(gè)月時(shí),存活率為70.6％,在添加B91.5g·L-1后大大延長(zhǎng)了保存時(shí)間,保存12個(gè)月存活率達(dá)到70.5％;光照強(qiáng)度對(duì)保存沒(méi)有顯著影響。
　　 3.福建杜鵑花屬主要種類遺產(chǎn)多樣性ISSR分析采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)15份杜鵑花科花卉進(jìn)行遺傳多樣性分析。結(jié)果表明:選出的11條ISSR引物總共擴(kuò)增出83條帶,擴(kuò)增帶在6～11條之間,平均產(chǎn)生7.6條擴(kuò)增帶；總共擴(kuò)增出的多態(tài)性譜帶為68條,多態(tài)性比率為82.0％,說(shuō)明

5、了此15份杜鵑種質(zhì)間存在較大的遺傳差異且遺傳多樣性高,具有豐富的多態(tài)性。根據(jù)擴(kuò)增條帶的多態(tài)性,構(gòu)建了杜鵑花科花卉的親緣關(guān)系樹(shù)狀圖,當(dāng)遺傳距離為0.56,15份杜鵑花可分為5大類群:第1類包括馬銀花、二喬杜鵑品種1、二喬杜鵑品種2、二喬杜鵑品種3、鹿角杜鵑；第2類只有云錦杜鵑,即云錦杜鵑單獨(dú)成為一類。第3類只有猴頭杜鵑,即猴頭杜鵑單獨(dú)成一類；第4類包括毛果杜鵑、丁香杜鵑、黑葉杜鵑、紫薇春杜鵑、鹿角杜鵑、高山杜鵑:第5類為滿山紅和映山紅。當(dāng)

6、遺傳距離為0.59,15份杜鵑花可分為2大類群:第1類包括馬銀花、二喬杜鵑3個(gè)品種、鹿角杜鵑、云錦杜鵑.第2類包括毛果杜鵑、黑葉杜鵑、猴頭杜鵑、丁香杜鵑、高山杜鵑、紫薇春杜鵑、溪蚌杜鵑。
　　 4.福建旗山國(guó)家森林公園馬銀花群體的ISSR分析采用ISSR技術(shù)對(duì)旗山2個(gè)馬銀花群體(東陽(yáng)湖群體和梅雨潭瀑布群體)進(jìn)行遺傳多樣性分析。結(jié)果表明:根據(jù)Nei's指數(shù),兩個(gè)群體總的遺傳多樣性為Ht=0.3901,群體間遺傳多樣性Ht=0.39