沉默OsC4H和Os4CL基因?qū)λ厩o稈木質(zhì)素含量和抗倒性影響的研究.pdf

1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究牛簽名：時間：瑚年‘月尹日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)

2、保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：第一導(dǎo)師簽名：愨抖事時間：現(xiàn)弘年多月羅日時間：吵年6月／／目摘要腫fillIIll[IllI[IIIIIIY1735111水稻(OryzaSativaL)莖稈的主要成分是木質(zhì)素、纖維素和半纖維素。木質(zhì)素是細(xì)胞

3、壁的重要組成成分，是維持植物正常結(jié)構(gòu)、疏導(dǎo)水分和養(yǎng)料、防御病原菌侵害的重要組分。由于木質(zhì)素的結(jié)構(gòu)復(fù)雜，在生產(chǎn)生活中很難被有效利用，不但給人類的生產(chǎn)活動造成很多不便，而且污染人類賴以生存的環(huán)境。利用RNAi技術(shù)，抑制木質(zhì)素合成途徑中關(guān)鍵酶基因OsC4H和Os4CL的表達(dá)，從源頭上減少木質(zhì)素的產(chǎn)出，對養(yǎng)殖業(yè)、造紙業(yè)和環(huán)境保護等都具有非常重大的意義。本研究通過對T1代轉(zhuǎn)基因植株半定量RTPCR分析、酶活測定、木質(zhì)素和纖維素含量測定、組織切片觀

4、察、倒伏指數(shù)和農(nóng)藝性狀的測定，分析了沉默OsC4H和Os4CL基因?qū)λ厩o稈木質(zhì)素含量和抗倒性的影響，獲得了以下研究結(jié)果：1通過潮霉素篩選和潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hpt)的PCR檢測，從T1代中鑒定出陽性植株，用作后續(xù)研究材料。轉(zhuǎn)化載體上帶有篩選標(biāo)記基因(asred)，陽性轉(zhuǎn)基因植株的成熟種子呈紅色。2對轉(zhuǎn)基因和野生型植株進行了半定量RTPCR分析，發(fā)現(xiàn)Os4CL基因在各株系中的轉(zhuǎn)錄水平有明顯差異，其中4CLRNAi株系下降最為明顯，其

5、次是雙干擾株系，在C4HRNAi株系中Os4CL的轉(zhuǎn)錄水平與野生型相比沒有明顯差異。OsC4H基因在各株系中的轉(zhuǎn)錄水平存在差異，在C4HRNAi株系中轉(zhuǎn)錄水平最低，其次是雙干擾株系，而4CLRNAi株系中，沒有發(fā)現(xiàn)OsC4H的轉(zhuǎn)錄水平有明顯變化。3對轉(zhuǎn)基因株系的4CL和C4H酶活分析比較。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因株系的4CL酶活相對于野生型都有不同程度降低，其中4CLRNAi株系的4CL相對酶活下降最明顯，比野生型降低約283％。在各轉(zhuǎn)基因株系中，C

6、4H酶活下降幅度最大的是C4HRNAi株系，比野生型平均下降約255‰4CLRNAi株系、C4HLRNAi株系和C4HLPRNAi株系依次比野生型下降約45％、116％和88％。4對轉(zhuǎn)基因株系木質(zhì)素和纖維素含量的測定結(jié)果表明，4CLRNAi株系、C4HIⅢAi株系、C4HLRNAi株系和C4HLPRNAi株系的木質(zhì)素含量分別比野生型下降約275％、250％、192％和154％。而各轉(zhuǎn)基因株系的纖維素含量都有不同幅度的升高，4CLRNAi