大珠母貝微星DNA的分離篩選及其遺傳多樣性研究.pdf

1、大珠母貝主要分布于中國、印尼、澳大利亞等國的熱帶和亞熱帶海區(qū)，是生產(chǎn)海水珍珠的最大的貝類，具有極高的經(jīng)濟價值。本文采用生物素標記的(CA)15探針和磁珠富集法構建了大珠母貝的基因組微衛(wèi)星富集文庫，并設計引物進行PCR篩選，獲得了10個多態(tài)位點。利用這10個多態(tài)位點，對海南三亞的養(yǎng)殖大珠母貝群體以及中國、印度尼西亞的大珠母貝養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性和遺傳分化進行了分析，目的是為大珠母貝的種質資源保護和遺傳選育提供基礎資料。
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2、通過構建的大珠母貝基因組微衛(wèi)星富集文庫中，共得到近2000個單克隆菌落，隨機挑選1200個克隆用探針引物(CA)15和載體引物進行第2次篩選，獲得候選克隆298個。測序結果表明，微衛(wèi)星序列長度范圍是101-787bp，其中211個含有251個微衛(wèi)星微衛(wèi)星結構域。其中兩堿基(CA/GT)n重復序列有204個，占了絕大多數(shù)(81％)，此外還發(fā)現(xiàn)了AG、AT、GC、TC、CAA、AGG、GATA、GACA、GTGC、GACG等重復類型。在獲得

3、的251個微衛(wèi)星位點中，完美型微衛(wèi)星159個，占63％;非完美型80個，占32％;復合型12個，占5％。用引物設計軟件primer5.0設計引物90對，合成30對，篩選出21對有效擴增的引物，種群擴增獲得10個多態(tài)位點。
　　 2.對我國海南三亞大珠母貝3個不同世代(2007、2009和2010)的養(yǎng)殖群體進行PCR擴增后發(fā)現(xiàn)：3個群體共90個個體(3×30)在10個多態(tài)位點共檢測出60個等位基因，每個位點等位基因數(shù)2-8個，平

4、均每個位點6個，3個群體在這60個等位基因中分別丟失了1個、2個和4個稀有等位基因。平均期望雜合度（He）分別為0.7179、0，6947、0.6795，平均觀測雜合度（Ho)分別為0.5333、0.4267、0.4833。平均多態(tài)信息含量PIC值分別為0.6399、0.6714、0.6295。Shannon多樣性指數(shù)平均值分別為1.4741、1.3798、1.3757。平均遺傳偏離指數(shù)D值均為負，表明群體中存在一定程度的雜合子缺失。H

5、ardy-Weinberg平衡卡方檢驗，在所檢測的30個數(shù)據(jù)中（3個種群×10個位點），有18個偏離了遺傳平衡。兩兩群體間的平均近交系數(shù)介于0.2273-0.2601之間，表明群體內的近交程度比較嚴重。兩兩群體間的平均遺傳分化指數(shù)介于0.0204-0.0462，遺傳分化顯著（P＜0.01）。上述結果表明，3個世代的群體遺傳多樣性水平已經(jīng)出現(xiàn)了逐漸降低的趨勢，近交程度增加，因此人工繁育工作中應注意避免遺傳多樣性的降低。
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6、中國和印尼大珠母貝群體遺傳多樣性的分析表明：三亞群體和印尼群體的平均等位基因數(shù)分別是5.8和5.5；平均期望雜合度分別是0.6947和0.6624;平均觀測雜合度分別是0.4267和0.4300;平均Shannon多樣性指數(shù)分別是1.3798和1.3354;平均多態(tài)信息含量PIC值分別是0.6399和0.6111.，表明兩個群體的遺傳多樣性水平都比較高。顯著性檢驗表明，三亞群體的遺傳多樣性水平高于印尼群體（P＜0.01）。Hardy-W