水稻稻種相關(guān)細(xì)菌及其生防種衣劑的研究.pdf

1、了解種子上的微生物生態(tài)是獲得良好生物防治效果的基礎(chǔ),開發(fā)與種子相關(guān)的拮抗菌來防治作物病害是生物防治的一種有效方法。本論文對南方水稻種子上的細(xì)菌進(jìn)行了分離、鑒定,對其中具有致病性和拮抗性的細(xì)菌作了進(jìn)一步研究;并以篩選的拮抗細(xì)菌為主要成分,開展了生防種衣劑的研制。對種衣劑的理化性狀、貯藏性、作用機(jī)理及拮抗菌在水稻上的定殖作了研究。開發(fā)出有效防治水稻細(xì)菌性條斑病的生物種衣劑。
　　 本試驗(yàn)對南方稻種上可培養(yǎng)細(xì)菌的群體性狀開展了研究,共

2、收集了南方稻區(qū)107個(gè)種子樣品,分離獲得428株細(xì)菌菌株。所有菌株分別進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、脂肪酸分析、致病性測定和體外拮抗試驗(yàn),對其中具有致病性和拮抗性能的菌株作了16SrDNA分子生物學(xué)鑒定。在分離到的細(xì)菌中,革蘭氏陰性菌占65.2％,革蘭氏陽性菌占34.8％,共涉及20個(gè)屬,40種菌。占優(yōu)勢的細(xì)菌屬是Pseudomonas、Pantoea、Sphingomonas、Bacilllu、Microbacterium和Paenibacillus

3、。致病性測定表明,大約占總分離數(shù)88％的細(xì)菌菌株和對照相比無明顯癥狀;7％左右的菌株在接種的水稻上均能產(chǎn)生致病癥狀,并表現(xiàn)出較強(qiáng)的致病性,它們是Acidovoraxavenae subsp.avenae、Burkholderia glumae、Pseudomonas fuscovaginae、Xanthomonas oryzae pv.oryzae和Xanthomonas oryzae pv.oryzicola;另外5％左右的菌株分別被

4、鑒定為Bacilllu pumilus、Microbacterium barkeri、Pantoeaagglomerans、Pantoea ananatis,Paenibacillus polymyxa、Pseudomonas aeruginosa、Pseudomonas syringae syringae和Xanthomonas sp.,在接種水稻后部分植株產(chǎn)生致病癥狀,但致病性表現(xiàn)相對較弱。體外拮抗試驗(yàn)表明,占總分離菌12.4％的細(xì)

5、菌表現(xiàn)出對水稻細(xì)條病菌的拮抗性,涉及到14個(gè)種。篩選到的拮抗菌Pseudomonas putida A N51和Paennibacillus lentimorbus N72具有較強(qiáng)的拮抗水稻細(xì)菌性條斑病菌的能力,被用作生防制劑的開發(fā)。從稻種上分離到了泛菌屬菠蘿泛菌(Pantoa ananatis),分離頻率達(dá)32.7％,是分離到的優(yōu)勢種,而此前國內(nèi)尚未有該菌的報(bào)道,其中14.3％的菌株在接種水稻后產(chǎn)生了致病癥狀,P.ananatis在國

6、外被認(rèn)為是一種非傳統(tǒng)的病原體,有待深入研究。
　　 本試驗(yàn)以種子上篩選出來的拮抗菌緩病類芽孢桿菌N72和惡臭假單胞菌N51為有效成分,開展了生物種衣劑的研制,生物種衣劑N72表現(xiàn)出較好的生理生化性狀、貯藏性和田間防治效果。在田間試驗(yàn)中,經(jīng)N72生物種衣劑處理后,對細(xì)條病的防效達(dá)到72.71％,增產(chǎn)7.88％。在生防菌的定殖試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)用生物種衣劑N72和N51包衣種子,能夠成功地將生防菌株N72和N51接種到水稻種子上,并隨著種子

7、的萌發(fā)、出苗和生長向上運(yùn)轉(zhuǎn),定殖于水稻幼苗的根際、莖和葉部。播種60d后,在植株的各部位仍能檢測到N72-Rif和N51-Rif,并且在根際的定殖量顯著高于其它部位,說明良好的根際定殖能力也是拮抗菌株發(fā)揮生防作用的機(jī)制之一。在生物種衣劑的作用機(jī)理研究中發(fā)現(xiàn)用生防細(xì)菌N72和N51配置成的生防種衣劑包衣處理水稻種子后,水稻秧苗葉片內(nèi)的POD酶活性和POO酶活性增加,而PAL酶活性沒有變化。在接種了水稻細(xì)條病菌以后,三種酶的活性均出現(xiàn)了先下