豬鏈球菌SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)血清分型方法的建立及在流行病學(xué)調(diào)查中的應(yīng)用.pdf

1、本試驗(yàn)用SPA協(xié)同凝集的方法對(duì)豬鏈球菌35個(gè)參考菌株進(jìn)行血清學(xué)分型的研究，并應(yīng)用初步建立的SPA協(xié)同凝集的方法，結(jié)合PCR分型方法和MLST分型方法，對(duì)中國部分地區(qū)豬鏈球菌的流行病學(xué)進(jìn)行調(diào)查分析，結(jié)果如下：
　　 豬鏈球菌35個(gè)參考菌株的協(xié)同凝集試驗(yàn)：常規(guī)方法制備SPA菌懸液，將其依次稀釋為100％、80％、50％、40％、30％、10％等幾個(gè)梯度，血清倍比稀釋，血清和SPA菌懸液1:2的比例致敏。凝集試驗(yàn)設(shè)立三組對(duì)照：致敏SP

2、A和抗原菌液、未致敏SPA和抗原菌液，SPA陰性菌懸液和抗原菌液。結(jié)果表明，致敏SPA的最佳工作濃度為50％，30個(gè)血清型的抗血清工作濃度介于25～26之間，受試菌株的液體培養(yǎng)濃度在OD值0.55～1.0之間均可出現(xiàn)肉眼可見的凝集顆粒，濃度為OD值0.7左右時(shí)，凝集現(xiàn)象最為明顯，比較容易分辨。血清20型、31～34型觀察到的凝集反應(yīng)現(xiàn)象較弱，需要做進(jìn)一步研究。對(duì)照組不發(fā)生凝集。1、2、7、9分型PCR顯示為陽性的菌株，SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)

3、結(jié)果亦為陽性。與裸血清和抗原菌液的反應(yīng)相比，SPA協(xié)同凝集的敏感性得到較大的提高，凝集現(xiàn)象更加明顯，易于分辨，更能滿足臨床檢測的需求。
　　 中國部分地區(qū)豬鏈球菌的流行病學(xué)調(diào)查：對(duì)來自中國部分地區(qū)的370份豬淋巴結(jié)、扁桃體、肝臟、脾等組織樣品進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，共檢出gdh陽性的豬鏈球菌16株，表觀帶菌率為4.32％。1、2、7、9分型PCR檢出2型6株，7型3株，9型1株，SPA協(xié)同凝集檢測亦為對(duì)應(yīng)的血清型。應(yīng)用初步建立的SPA

4、協(xié)同凝集的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的20株豬鏈球菌進(jìn)行分型鑒定，共檢出1/2型1株，2型4株，后經(jīng)PCR鑒定亦為均呈2型陽性.檢出血清3型2株，4型2株，15型2株，10型、11型、16型各一株，首次在國內(nèi)檢出28型3株，29型1株。MLST分型結(jié)果顯示，從同一地區(qū)分離的兩株2型豬鏈球菌同屬ST1型，同時(shí)發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的ST型，被MLST數(shù)據(jù)庫收錄，命名為ST164。
　　 本試驗(yàn)建立的SPA協(xié)同凝集方法，結(jié)合PCR分子生物學(xué)的方法，可以準(zhǔn)