甘藍(lán)型油菜隱性細(xì)胞核雄性不育基因的分子標(biāo)記.pdf

1、甘藍(lán)型油菜隱性細(xì)胞核雄性不育系7-7365A的育性受兩對隱性重疊不育基因（ms3ms3、ms4ms4）和一對隱性上位基因

2、育種中的應(yīng)用將會(huì)越來越廣泛。
　　 本研究以7-7365A衍生材料7-736512AB兩型系為材料，圍繞雄性不育育性恢復(fù)基因（BnMs4）及不育基因（Bnms4）開展了以下工作：
　　 1）利用不育材料7-736512A（Bnms3ms3ms4ms4RfRf）與可育材料7-736512B（Bnms3ms3Ms4ms4RfRf）構(gòu)建Bulk池篩選768對AFLP引物，獲得12個(gè)與BnMs4連鎖的AFLP標(biāo)記，將標(biāo)記差異片段

3、回收、克隆、測序并設(shè)計(jì)引物轉(zhuǎn)化SCAR標(biāo)記。獲得2個(gè)SCAR標(biāo)記（SM25，SM129），位于目標(biāo)基因的同側(cè)，遺傳距離分為0.6cM、0.75cM。
　　 2）對獲得的12個(gè)與BnMs4連鎖的AFLP標(biāo)記中8個(gè)標(biāo)記通過PCR Walking技術(shù)進(jìn)行側(cè)翼序列分離，共計(jì)獲得12kb的標(biāo)記側(cè)翼序列信息，依據(jù)得到的側(cè)翼序列，設(shè)計(jì)引物轉(zhuǎn)化SCAR標(biāo)記。獲得2個(gè)SCAR標(biāo)記（SM98，SM113），同上述兩個(gè)SCAR標(biāo)記同側(cè)，遺傳距離分為0

4、.85cM、1.2cM。
　　 3）利用不育材料7-736512A（Bnms3ms3ms4ms4RfRf）與純合可育材料7－736512B（Bnms3ms3Ms4Ms4RfRf）構(gòu)建Bulk池篩選512對AFLP引物，獲得8個(gè)與Bnms4連鎖的AFLP標(biāo)記，將標(biāo)記差異片段回收、克隆、測序設(shè)計(jì)引物轉(zhuǎn)SCAR。結(jié)果獲得2個(gè)SCAR標(biāo)記（Sm163，Sm312）。
　　 4）將獲得的SCAR標(biāo)記用于育種實(shí)踐，發(fā)現(xiàn)SM113與S