甘藍(lán)型油菜顯性細(xì)胞核雄性不育相關(guān)基因2-I05功能研究.pdf

1、本研究在獲得了甘藍(lán)型油菜細(xì)胞核雄性不育相關(guān)基因2-I05 cDNA（GenBank登錄號EU306599）的基礎(chǔ)上，利用生物信息學(xué)方法對其進(jìn)行分析，然后構(gòu)建反義抑制載體并轉(zhuǎn)化擬南芥和甘藍(lán)型油菜以明確該基因的功能和對擬南芥和甘藍(lán)型油菜植株生長和育性的影響。所做工作及主要結(jié)論如下：
　　 1．對雄性不育相關(guān)基因2-I05基因（GenBank登錄號EU306599）進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。2-I05的cDNA編碼357個(gè)氨基酸。其編碼蛋

2、白質(zhì)主要位于細(xì)胞核內(nèi)，在擬南芥中檢索到與之同源的RAD23-like蛋白，該蛋白是一種參與DNA核苷酸切除修復(fù)的蛋白質(zhì)。對來自不同植物的9個(gè)RAD23-like蛋白質(zhì)氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果表明：RAD23-like在氨基酸序列上的進(jìn)化與植物的進(jìn)化基本保持一致，同科植物來源的RAD23-like蛋白質(zhì)較科間植物來源的遺傳變異小。
　　 2．構(gòu)建了基因2-I05反義抑制植物表達(dá)載體并對擬南芥進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化。成功構(gòu)建了2-I05

3、反義抑制植物表達(dá)載體，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序浸染的方法將基因2-I05反義序列導(dǎo)入擬南芥Columbia中，收獲的種子經(jīng)30mg/L的潮霉素（Hyg）的抗性篩選，獲得了具有潮霉素抗性的T1代陽性植株23株。但因培養(yǎng)條件差，最終只有4株T1代擬南芥存活下來；經(jīng)PCR檢測驗(yàn)證，其中有2株為陽性植株。
　　 3．對T2代擬南芥進(jìn)行了潮霉素（Hyg）的抗性篩選、抗性植株P(guān)CR檢測、UV處理和RT-PCR檢測。RT-PCR結(jié)果表明：在組成

4、性啟動子的作用下，2-I05反義抑制基因能夠在花蕾、葉片中抑制野生型擬南芥中編碼RAD23-like蛋白質(zhì)的同源基因。UV處理結(jié)果表明，相對Columbia野生型而言，T2代擬南芥對UV更為敏感，說明2-I05基因其功能主要是參與了植物體UV損傷修復(fù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果并未證實(shí)前人的這一假設(shè)即，參與植物體UV損傷修復(fù)的2-I05基因能引起植株不育；但該基因可能參與了雄蕊長度的調(diào)控。
　　 4．嘗試了用2種轉(zhuǎn)基因方法將基因2-I05反義抑制