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1、自陳鳳祥報道隱性細(xì)胞核雄性不育材料9012A以來,大家一直認(rèn)為其育性是由兩對隱性重疊基因(Bnms3ms3、Bnms4ms4)和一對上位抑制基因(Bnrfrf)共同作用的遺傳模式,上位基因純合隱性時(Bnrfrf)可以抑制Bnms3ms3ms4ms4所控制的不育,使植株表現(xiàn)為雄性可育。但是俎峰等利用分子標(biāo)記共用和回交自交實驗,以及連鎖不平衡分析,認(rèn)為控制736512AB材料(與9012A遺傳模式相同)育性的BnMs4和BnRf很可能是復(fù)
2、等位基因。董發(fā)明等也通過9012AB及其臨保系T45,與來源不同的自交系和常規(guī)品種進行雜交、測交實驗,并對其后代進行遺傳分析,在此基礎(chǔ)上提出了9012AB的遺傳新模式。二者得出一個共同的結(jié)論,認(rèn)為9012AB的育性只受2對核基因(BnMs3和Bnrf)控制,其中Bn Ms3位點存在2個等位基因,可育基因BnMs3和隱性不育基因Bnms3,而Bnrf位點存在3個復(fù)等位基因,可育基因BnMs,不育基因Bnms和隱性上位基因Bnrf。究竟是緊
3、密連鎖還是復(fù)等位?這兩對基因間的關(guān)系還有待深入證明研究。因此BnMs4和BnRf的精細(xì)定位及克隆,對進一步理解此核不育材料的分子機理,以及分子標(biāo)記輔助選擇都具有十分重要的意義。本實驗以736512AB為材料,采取圖位克隆的方法,利用各種生物信息開發(fā)更近的分子標(biāo)記,對甘藍(lán)型油菜隱性核不育恢復(fù)基因BnMs4進行精細(xì)定位以及候選區(qū)段的確定,取得的主要結(jié)果如下:
1)前人對BnMs4初定位結(jié)果為兩側(cè)最短遺傳圖距分別為1.0cM和2
4、.4cM,在此基礎(chǔ)上本實驗開發(fā)設(shè)計了一批與BnMs4更近的分子標(biāo)記,CL14,CL15,CL16,H3-2,ssr103YH,DD29,34BJ4,其中ssr103YH和CL14分別將兩側(cè)最短遺傳距離縮短到0.20cM和0.10cM。
2)含有白菜和埃塞俄比亞芥菜亞基因組優(yōu)勢的749材料對736512AB進行輪回改良,利用一個改良后的分離群體(含6060個單株),將BnMs4定位到兩側(cè)分別為1.57cM和0.10cM的遺傳
5、距離。
3)利用一個近等基因系736512AB的多代兄妹交群體(含1993個單株),將BnMs4定位到兩側(cè)分別為0.20cM和0.15cM的遺傳距離。
4)比較測序發(fā)現(xiàn)Bnms4在非編碼序列的一個SSR位點發(fā)生了6個堿基的缺失突變,并且BnMs4和Bnms4在cDNA水平存在大量SNP差異。
5)篩選BAC文庫進行shotgun測序,獲得部分BnMs4附近的基因信息。
6)利用兩側(cè)
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