基于甘藍型油菜恢復基因BnMs1創(chuàng)建全不育群體初探.pdf

1、油菜是我國最重要的油料作物之一，目前主要利用雜種優(yōu)勢來提高油菜產(chǎn)量、品質(zhì)及抗性，而油菜隱性細胞核雄性不育是油菜雜種優(yōu)勢利用的重要途徑。甘藍型油菜隱性核不育系S45AB的不育性受兩對隱性基因控制，利用其雜交制種時，母本行中50%的可育株需人工拔除，限制了它的廣泛應用。因此，對該不育系利用的主要問題是如何低成本去除母本行中50%的可育植株。所以，本實驗的主要目的是獲得100%全不育群體。主要研究結果如下：
　　 1.AtLEC1(A

2、rabidopsis thaliana Leafy Cotyledonl)的克隆及誘導型無選擇標記載體的構建與轉化
　　 根據(jù)擬南芥基因組的序列設計相應的引物，克隆了AtLEC1。與公布的序列相比(TAIR，The Arabidopsis Information Resource)，克隆的LEC1基因序列雖在669bp處堿基A/T被G/C替換，但其轉錄翻譯的氨基酸序列是相同的，因此克隆的AtLEC1可用于后續(xù)研究。參考Venka

3、ta et al.(2006)改進的蛻皮素誘導表達系統(tǒng)的構建方法，將AtLEC1與該系統(tǒng)的主要誘導元件以及恢復基因BnCYP704B1三者相連后分別導入到原始的和去除標記基因的載體pCAMBIA2300中，將構建的載體分別轉化擬南芥和油菜。
　　 在擬南芥轉化中獲得了17株抗性苗，經(jīng)特異性引物檢測，T0代中有9株陽性苗，其轉化率為54.1%。在油菜轉化中通過特異性的引物篩選出6株含有目的基因的轉基因植株，且這些轉基因植株都含有標

4、記基因。
　　 2.AtLEC1在擬南芥和油菜中的誘導表達
　　 將獲得的9株T0代擬南芥陽性植株收獲后播種得到T1代，各株系分別噴施四個濃度梯度(0nM，1000nM，5000nM，10000nM)的誘導劑甲氧蟲酰肼(methoxyfenozide)，并觀察植株的生長狀況，大部分植株生長正常，沒有出現(xiàn)壞死斑點，但其中一個株系的生長態(tài)勢在1000nM，5000nM和10000nM三個濃度梯度下相對野生型有差異。
　

5、　 在油菜轉基因誘導表達實驗中主要采用了兩種方法：(1)紙床發(fā)芽實驗，將T0代種子分別播于四個濃度梯度(同上)的誘導劑浸濕的紙床上，觀察其發(fā)芽和生長情況，6個株系的轉基因植株均能正常發(fā)芽，子葉正常，沒有發(fā)現(xiàn)壞死斑點；(2)田間誘導實驗，將收獲的6株T0代種子進行田間播種，苗期時每三天噴施一次誘導劑，誘導劑濃度梯度同上。半個月后觀察植株的生長狀況，6個株系均能正常生長發(fā)育，沒有出現(xiàn)致死植株，在葉片上也沒有發(fā)現(xiàn)壞死斑點。植物后期發(fā)育良好，