厚樸組織培養(yǎng)技術(shù)研究.pdf

1、本研究對(duì)厚樸組織培養(yǎng)技術(shù)體系進(jìn)行了探索，分別對(duì)厚樸外植體滅菌、啟動(dòng)培養(yǎng)、愈傷組織芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗移栽等方面進(jìn)行了研究，著重探索了厚樸組織培養(yǎng)過(guò)程中最佳培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)程序，對(duì)以后厚樸品種的改良及遺傳轉(zhuǎn)化等研究奠定了技術(shù)基礎(chǔ)，并為厚樸的組培工廠化育苗提供了理論依據(jù)，具有重要的科學(xué)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。其主要研究結(jié)果如下： 1.厚樸外植體材料本身消毒滅菌較困難且易受到季節(jié)因素的影響。就厚樸外植體的取材部位和取材時(shí)間來(lái)

2、說(shuō)，以4月-6月取厚樸種子發(fā)芽苗莖經(jīng)過(guò)75％酒精處理30-45s后，再以0.1％HgCl2溶液滅菌6min的處理效果最好，平均污染率只有17.1％，平均存活率為70.1％；其次是厚樸頂芽及側(cè)芽以75％酒精處理30-45s后，再以0.1％HgCl2溶液滅菌8min，平均污染率為30.3％，平均存活率可以達(dá)到69.3％；以7月-9月消毒最難，尤其是葉片、葉柄、側(cè)芽最不容易消毒，平均污染率高達(dá)60.4％，而平均存活率僅有17.5％。

3、2.啟動(dòng)培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明： (1)厚樸外植體的取材季節(jié)應(yīng)選擇4月-6月為最佳，在4-6月以材料以厚樸種子發(fā)芽苗莖最好；其余時(shí)間以厚樸頂芽及側(cè)芽最好。 (2)在附加不同濃度NAA的B5培養(yǎng)基上，厚樸外植體均可誘導(dǎo)出愈傷組織且不同濃度的NAA對(duì)厚樸外植體的啟動(dòng)速度有極顯著性影響。當(dāng)NAA濃度為0.1mg·L-1時(shí)，外植體啟動(dòng)速度最快，平均啟動(dòng)速度達(dá)到9.55d?？梢?jiàn)啟動(dòng)培養(yǎng)階段對(duì)于厚樸外植體來(lái)說(shuō)較低濃度的NAA促進(jìn)啟動(dòng)速度加

4、快，濃度升高時(shí)則有利于愈傷組織的形成。 (3)分別在MS和B5基本培養(yǎng)基上添加不同濃度6-BA。兩種基本培養(yǎng)基中B5培養(yǎng)基上的外植體平均啟動(dòng)速度為15.85d，明顯快于MS培養(yǎng)基上的平均啟動(dòng)速度；兩種基本培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織分化率的影響不顯著，對(duì)芽體分化率的影響顯著。以B5培養(yǎng)基對(duì)厚樸外植體芽體分化培養(yǎng)效果較好，平均芽體分化率達(dá)到15.39％，高于MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果。對(duì)6-BA不同濃度水平對(duì)厚樸外植體培養(yǎng)結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)不同濃度6-B

5、A對(duì)啟動(dòng)速度影響均有顯著性影響，當(dāng)6-BA4.0mg·L-1時(shí)啟動(dòng)速度最快，平均啟動(dòng)速度達(dá)到14.28d，平均芽分化率也最大，達(dá)到44.84％。當(dāng)是6-BA濃度為3.0mg·L-1時(shí)，平均愈傷組織分化率最高，達(dá)到45.95％。 (4)在附加不同濃度6-BA、2，4-D的B5培養(yǎng)基上，各個(gè)處理均有一些愈傷組織產(chǎn)生和少量芽體分化。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析表明：6-BA和2，4-D的濃度對(duì)厚樸外植體愈傷組織分化率均有極顯著影響。因此，二者對(duì)愈傷組

6、織誘導(dǎo)的最佳組合為：B5+6-BA3.0mg·L-1+2，4-D3.0mg·L-1。不同的6-BA濃度水平還對(duì)厚樸外植體芽體分化率有極顯著性影響，2，4-D濃度水平則對(duì)厚樸外植體芽體分化率有顯著性影響。因此，二者對(duì)芽分化誘導(dǎo)的最佳組合為：B5+6-BA4.5mg·L-1+2，4-D2.0mg·L-1。 (5)在附加不同濃度6-BA、NAA的B5培養(yǎng)基上，各處理也均有一些愈傷組織產(chǎn)生和芽體分化。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析表明；6-BA和NAA的

7、濃度對(duì)厚樸外植體愈傷組織分化率均有極顯著影響。因此，二者對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的最佳組合為：B5+6-BA4.5mg·L-1+NAA1.0mg·L-1。不同的6-BA濃度水平還對(duì)厚樸外植體芽體分化率有極顯著性影響，NAA濃度水平則對(duì)厚樸外植體芽體分化率有顯著性影響。因此，二者對(duì)芽分化誘導(dǎo)的最佳組合為：B5+6-BA5.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1。 3.厚樸愈傷組織芽誘導(dǎo)培養(yǎng)試驗(yàn)中6-BA濃度和NAA濃度對(duì)厚樸愈傷組織芽誘導(dǎo)

8、均有顯著性影響，2，4-D濃度則對(duì)芽誘導(dǎo)無(wú)顯著性影響。6-BA濃度、NAA濃度、2，4-D濃度三者對(duì)厚樸愈傷組織芽誘導(dǎo)效果影響的主次關(guān)系是6-BA濃度>NAA濃度>2，4-D濃度。厚樸愈傷組織芽誘導(dǎo)的最佳組合為：B5+6-BA5.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1+2，4-D1.0mg·L-1，芽誘導(dǎo)率最高達(dá)61.66％。 4.增殖培養(yǎng)試驗(yàn)中不同6-BA濃度水平對(duì)厚樸芽增殖系數(shù)有極顯著性影響，不同NAA濃度水平對(duì)其增殖系數(shù)

9、有顯著性影響，蔗糖濃度對(duì)增殖系數(shù)無(wú)顯著性影響。6-BA濃度、NAA濃度、蔗糖濃度三者對(duì)增殖效果影響的主次關(guān)系是：6-BA濃度>NAA濃度>蔗糖濃度。增殖培養(yǎng)的最佳組合為：B5+6-BA5.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+蔗糖15g·L-1，增殖系數(shù)最高達(dá)4.89。 5.在壯苗培養(yǎng)試驗(yàn)中B5+NAA0.5mg·L-1+GA30.3mg·L-1組合最有利于壯苗培養(yǎng)。 6.生根培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明： (1)基本培

10、養(yǎng)基、IBA和NAA三者對(duì)生根率影響的主次關(guān)系為，基本培養(yǎng)基>IBA>NAA?；九囵B(yǎng)基與IBA的濃度水平對(duì)生根率有極顯著性影響，而NAA濃度水平對(duì)生根率無(wú)顯著性影響。B5基本培養(yǎng)基對(duì)厚樸組培苗生根率的效應(yīng)最好，平均生根率達(dá)到45.71％。組培苗生根的最佳組合為：B5+IBA1.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1，高達(dá)62.66％。 (2)ABT1、ABT3各濃度均可誘導(dǎo)生根，以處理HG14：B5+ABT31.5mg·L-

11、1+蔗糖20g·L-1生根率最高，達(dá)到61.23％；其次是HG12：B5+ABT13.0mg·L-1+蔗糖20g·L-1生根率達(dá)到60.01％。 7.不同煉苗方式對(duì)組培苗移栽成活率有極顯著影響。最佳處理方式是：閉瓶鍛煉6d后開(kāi)瓶煉苗6d的移栽成活率最高，平均移栽成活率達(dá)92.19％；其次是閉瓶鍛煉6d后開(kāi)瓶煉苗3d，平均移栽成活率也達(dá)到了87.02％。不同基質(zhì)處理對(duì)移栽成活率有極顯著影響。最有利于移栽的基質(zhì)為沙：田園土=1：1，