豬PROP-1及POU1F1基因mRNA前體不同剪接形式發(fā)育性表達規(guī)律研究.pdf

1、PROP-1基因是一種垂體轉錄因子，是垂體特異性轉錄因子(POU1F1)基因的祖先蛋白，啟動胚胎期POU1F1基因的起始表達及維持個體出生后的持續(xù)表達。而POU1F1基因是動物垂體前葉特異表達的一種具有重要功能的轉錄因子。POU1F1與垂體中PRL、GH、TSH-β以及自身的啟動子結合，調控這些基因的轉錄，通過調節(jié)這些基因的表達而在機體的生長、發(fā)育、繁殖和免疫等很多方面起著重要作用。本研究采用半定量RT-PCR技術分析了PROP1及PO

2、U1F1基因mRNA前體不同剪接形式及GH、PRL、TSHβ基因mRNA在梅山公、母豬垂體中不同生長階段的表達規(guī)律；并克隆了POU1F1基因的cDNA；主要研究結果如下： 1.豬垂體中，首次鑒定了PROP1基因mRNA前體兩種剪接形式(PROP1α和PROP1β)的存在，以及驗證了POU1F1基因mRNA前體四種剪接形式(POU1F1α、POU1F1β、△3 POU1F1和△4 POU1F1)存在，并分析了PROP1及POU1F

3、1基因mRNA前體不同剪接形式及GH、PRL、TSHβ基因的發(fā)育性表達規(guī)律。 2.在梅山公、母豬垂體中PROP1α表達豐度高于PROP1β，且梅山公、母豬呈現(xiàn)不同表達特點：梅山公豬中PROP1α的表達在1d垂體中維持較高水平，而后開始降低至60d，90d上升至高峰而后又開始降低至150d。梅山母豬PROP1α的表達在初生時較低、升高至30d后開始降低，直至60d，之后開始升高并趨于平衡，在30d時表達量最高。梅山公、母豬PROP

4、1β的發(fā)育性表達的動態(tài)變化規(guī)律相似，即先升高后降低，而后又升高并趨于平衡的一種變化規(guī)律。 3.在梅山公、母豬垂體中POU1F1基因的mRNA前體的四種剪接形呈現(xiàn)不同表達特點；公豬POU1F1α表達呈現(xiàn)先降低，后升高，再降低的特點；而母豬POU1F1α表達呈現(xiàn)先升高，后降低，再升高的特點。公豬POU1F1β表達在1-60d變化較小，至90d升高至高峰而后降低；而母豬POU1F1-β發(fā)育性表達規(guī)律與公豬相似，但早期的豐度高于公豬?！?/p>

5、3 POU1F1在公豬發(fā)育過程中表達水平較低，而在母豬的性成熟期前后(90d)有一個明顯的升高。△4 POU1F1的表達豐度在梅山公、母豬1d、60 d、90 d、150d垂體中相似。而在30d垂體中母豬明顯高于公豬。 4.對梅山公、母豬中GH、PRLR及TSHβ基因mRNA的發(fā)育性表達分析發(fā)現(xiàn)，GH、PRLR基因mRNA在公母垂體內的變化存在差異，存在性別的二相性；公母的表達高峰出現(xiàn)時間也不一致；公母豬GH表達整體上呈現(xiàn)先升高

6、后降低的趨勢，公豬PRL表達呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，而母豬呈現(xiàn)先降低而后升高規(guī)律，公母豬TSHβ表達總體上呈現(xiàn)發(fā)育早期表達水平較高，90d后降低。公豬早期表達有波動，而母豬早期表達較穩(wěn)定。 5.PROP1及POU1F1基因mRNA前體不同剪接形式的發(fā)育性表達規(guī)律比較顯示：在梅山公豬垂體中PROP1 mRNA前體兩種剪接形式與POU1F1β，△4 POU1F1表達的動態(tài)變化一致；在梅山母豬垂體中PROP1基因mRNA前體兩種剪接形

7、式與POU1F1基因mRNA前體四種不同剪接形式的表達動態(tài)變化總體上一致。 6.對POU1F1基因mRNA前體不同剪接形式及GH、PRL和TSHβ基因垂體內的表達規(guī)律進行比較發(fā)現(xiàn)，公豬的POU1F1α、△3 POU1F1與GH動態(tài)表達相似：公豬POU1F1β與PRL、TSHβ動態(tài)表達相似。 7.采用RT-PCR和克隆測序的方法，獲得了豬POU1F1基因長為876bp cDNA全序列。其與已發(fā)表序列同源性為99.7％，經D