羊干酪樣淋巴結(jié)炎PCR診斷方法的建立及其比較研究.pdf

1、綿羊和山羊干酪樣淋巴結(jié)炎(caseouslymphadenitisinsheepandgoat，簡稱CLA)也稱綿羊和山羊偽結(jié)核病(pseudotuberculosisinsheepandgoat)，是由偽結(jié)核棒狀桿菌(Corynebacteriumpseudotuberculosis)引起的一種人畜共患的慢性傳染病。偽結(jié)核棒狀桿菌能使綿羊、山羊、羊駝、駱駝、馬、牛等多種動物致病，發(fā)病特征是受害動物的淋巴結(jié)腫大，呈膿性干酪性壞死；有的在

2、肺、肝、脾和子宮角發(fā)生大小不等的結(jié)節(jié)，內(nèi)含淡黃色干酪樣物質(zhì)。病羊消瘦，生產(chǎn)性能下降，患病孕羊產(chǎn)出死胎，嚴(yán)重者死亡。由于該病發(fā)病緩慢，致死率低，以前常被人們忽視。但由于近年來發(fā)病區(qū)域的增大以及對畜牧養(yǎng)殖業(yè)的嚴(yán)重影響，而且發(fā)病后用各種治療方法效果也不佳，所以現(xiàn)在各個國家都對該病的預(yù)防、治療以及檢疫都逐漸重視起來。 該試驗(yàn)分別從2只疑似病羊的肩前淋巴結(jié)膿腫內(nèi)分離了2株菌，記為菌株A、菌株B，經(jīng)分離鑒定為偽結(jié)核棒狀桿菌。但分離株與參考菌

3、株(ATCC19410株)在生化特性方面還存在一定的差異。 將參考菌株(ATCC19410株)制成外毒素抗原，同時用參考菌株制成滅活苗，免疫山羊，采集其血液，分離血清，即為陽性血清。將臨床健康和菌體凝集抑制試驗(yàn)陰性羊的剖腹產(chǎn)胎兒的血清作為陰性血清。通過ELISA酶標(biāo)抗體和陽性血清最適濃度的選擇、外毒素抗原和陽性血清最適濃度的選擇試驗(yàn)，選用適當(dāng)?shù)目乖?、抗體、酶標(biāo)抗體濃度，設(shè)立空白孔、陽性孔、陰性孔做待檢血清的ELISA試驗(yàn)，得出陽

4、性判定值。以此建立CLA的ELISA診斷方法，用該方法檢測46份待檢羊血清，檢測到陽性羊2只，陽性檢出率為4.35％，這與菌體凝集抑制試驗(yàn)得到的結(jié)果相同。 參照已知的偽結(jié)核棒狀桿菌16SrRNA序列，設(shè)計(jì)合成了1對引物，用此引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到與預(yù)期相符的目的片段。目的片段的序列比較結(jié)果表明菌株A、菌株B與ATCC19410參考菌株同源性為96.8％和97.1％。結(jié)果表明，此試驗(yàn)中建立的PCR檢測方法是成功的。用該方法同時擴(kuò)