二喬刺槐愈傷組織超低溫保存及植株再生.pdf

1、植物材料在超低溫保存過程中，其物質(zhì)代謝、能量代謝及其它生命活動降至最低限度，從而避免了因長時間保存而帶來的變異可能性。因此，超低溫保存成為長期和穩(wěn)定保存植物種質(zhì)的有效方法之一。試驗(yàn)以木本植物二喬刺槐離體培養(yǎng)的愈傷組織作為材料，對其超低溫保存方法進(jìn)行研究，篩選出了適合的凍存程序，得到了50％以上的二喬刺槐愈傷組織成活率，并成功利用化凍后的二喬刺槐愈傷組織進(jìn)行了體外植株再生。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.利用程序降溫儀對二喬刺槐愈傷組織進(jìn)

2、行凍存時發(fā)現(xiàn)樣品降溫速率和冷槽降溫速率之間存在一定偏差，采用較慢的降溫速率和適當(dāng)時間的低溫停留可以縮小這一偏差，偏差的縮小有利于樣品成活率的提高。 2.采用4種冰凍保護(hù)劑對二喬刺槐愈傷組織進(jìn)行超低溫保存，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以冰凍保護(hù)劑（MS+10％DMSO+0.5mol·L-1蔗糖）處理下的愈傷組織凍后活力最高，相對成活率可達(dá)91.81％。冰凍保護(hù)劑（MS+10％DMSO+0.5mol·L-1蔗糖）可以作為二喬刺槐愈傷組織超低溫保存較適宜

3、的冰凍保護(hù)劑。 3.降溫過程中降溫速率和低溫停留時間會顯著影響二喬刺槐愈傷組織活力，某一溫度段的降溫方式如果不適宜將會顯著影響后續(xù)結(jié)果。適宜于二喬刺槐愈傷組織的控速降溫超低溫保存程序?yàn)椋豪洳垡?℃·min-1的速率降溫至-7℃停留1h后，再以0.1℃·min-1的冷卻速率將樣品冷卻至-20℃，然后平衡1h。接下來以0.3℃·min-1的冷卻速率將樣品冷卻至-40℃再投入液氮。 4.化凍后的愈傷組織用液體培養(yǎng)基（MS+5.