高效產(chǎn)胞外酶菌株的篩選及其對(duì)魚塘水體有機(jī)N、P的轉(zhuǎn)化作用.pdf

1、隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，水體環(huán)境惡化問題日趨嚴(yán)重，漸漸成為限制水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展的要素。為了尋找改良水質(zhì)的新方法，本試驗(yàn)以從自然界篩選具有高效產(chǎn)胞外酶能力、并且能夠有效消除水體中有機(jī)物質(zhì)的菌株為主要目的和研究意義。
　　 采集漁-稻復(fù)合系統(tǒng)中水稻根際的淤泥和魚塘的底泥，制備成土壤稀釋液。經(jīng)過涂布分離培養(yǎng)后，得到形態(tài)不同的菌落。
　　 利用微板法和蛋白酶篩選培養(yǎng)基分別篩選出產(chǎn)胞外堿性磷酸酶和蛋白酶的菌株，再分別通過酶活力測(cè)定對(duì)

2、所選菌株進(jìn)行復(fù)篩。磷酸苯二鈉法測(cè)定堿性磷酸酶活力，福林酚法測(cè)定蛋白酶活力。
　　 通過初篩和復(fù)篩篩選出有較強(qiáng)產(chǎn)胞外堿性磷酸酶和蛋白酶能力的菌株，擴(kuò)增培養(yǎng)后，將其所產(chǎn)酶液加入富營養(yǎng)水體中以研究胞外酶對(duì)水體中有機(jī)磷和有機(jī)氮的去除，及其對(duì)水體中磷元素和氮元素的影響。研究結(jié)果如下：
　　 (1)篩選出四株高效產(chǎn)胞外堿性磷酸酶菌株(R1,R3,R4和P3)：相對(duì)于對(duì)照組而言，四株菌株對(duì)水體的有機(jī)磷轉(zhuǎn)化效率分別達(dá)到55.09％,36

3、.36％,52.62％和54.23％。
　　 (2)篩選出兩株高效產(chǎn)蛋白酶菌株(PRO1和PRO9)；兩株菌株所產(chǎn)的蛋白酶能夠催化水體中的氨化反應(yīng)，減少水體有機(jī)氮含量。
　　 在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)一株既能產(chǎn)磷酸酶又能產(chǎn)蛋白酶的菌株R1(PRO9)，對(duì)其生長(zhǎng)產(chǎn)酶條件進(jìn)行研究后，得到以下結(jié)果：
　　 (1)在培養(yǎng)過程中，R1(PRO9)菌株所產(chǎn)的胞外堿性磷酸酶活性隨著菌株的數(shù)量增多而增強(qiáng)，而蛋白酶則在培養(yǎng)36h取得較高酶活性

4、后，不再隨菌體數(shù)量呈現(xiàn)上增趨勢(shì)。
　　 (2)R1(PRO9)菌株產(chǎn)堿性磷酸酶的最適溫度為37℃-47℃，而其所產(chǎn)的蛋白酶在67℃高溫下保持較高的酶活力水平。
　　 (3)R1(PRO9)菌株產(chǎn)堿性磷酸酶的最適pH為8-10，而產(chǎn)蛋白酶的最適pH為7，可見其所產(chǎn)的蛋白酶是一種中性蛋白酶。
　　 本試驗(yàn)篩選出的有較強(qiáng)產(chǎn)胞外酶能力的菌株，可用于轉(zhuǎn)化水體中的有機(jī)物質(zhì)，對(duì)改善養(yǎng)殖水體富營養(yǎng)化有一定的作用，具有較大的研究前