家蠶載脂蛋白Apolipophorin-Ⅲ識別功能的初步研究.pdf

1、昆蟲Apolipophorin-Ⅲ(ApoLp-Ⅲ)屬載脂蛋白家庭成員，近期有研究表明該蛋白為多功能蛋白，在昆蟲免疫信號識別中也發(fā)揮病原識別的功能。本研究以家蠶(Bombyx mori) P50來源的ApoLp-Ⅲ為研究對象，將apoLp-Ⅲ和gfp基因融合后在大腸桿菌BL21(DE3)中進行表達，用親和層析純化ApoLp-Ⅲ-GFP融合蛋白，對ApoLp-Ⅲ-GFP融合蛋白進行功能研究，為ApoLp-Ⅲ在昆蟲免疫系統(tǒng)的信號識別轉(zhuǎn)導(dǎo)中的

2、研究提供了新的證據(jù)。 已報道家蠶P50 ApoLp-Ⅲ的mRNA序列(Genbank登錄號：U59244)長623bp，ORF編碼186個氨基酸(aa)，軟件分析和文獻報道有兩種不同長度的信號肽，從N端開始分別為17個氨基酸和22個氨基酸進行C-末端GFP融合表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)去除不同信號肽的原核表達都很好。SDS-PAGE和western bloting驗證，ApoLp-Ⅲ-GFP獲得正確的表達，為了驗證ApoLp-Ⅲ蛋白的病原模

3、式識別功能，將親和層析純化的GFP融合蛋白分別與構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)、金龜子綠僵菌(Metarhizium anisopliae)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等微生物細胞進行結(jié)合試驗，用熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)ApoLp-Ⅲ蛋白與