新型CpG分子與豬IL6基因的融合及其免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)研究.pdf

1、為構(gòu)建顯著增加免疫調(diào)節(jié)范圍、增強(qiáng)免疫效應(yīng)的免疫分子，開拓研制分子免疫增強(qiáng)劑的新途徑，本實驗室設(shè)計合成了一種88bp、含有11個不同CpG基序的新型CpG免疫刺激分子，用離子交聯(lián)法制備了殼聚糖納米顆粒(CNP)包裹CpG(CpG-CNP)，然后用該CpG-CNP免疫21日齡的昆明鼠，在免疫后35日以大腸桿菌K88，K99口服攻毒實驗小鼠。分別在免疫后的第0，7，14，21，28，35，42和49天從小鼠的尾部靜脈取血，然后通過ELISA法

2、檢測其IgG、IgM和IgA，IL-2、IL-4和IL-6以及免疫細(xì)胞的數(shù)量變化。將該CpG片段BglⅡ酶切，插入豬IL6基因的VR1020真核表達(dá)載體(VPIL6)，經(jīng)StuⅠ酶切鑒定，證實CpG與豬IL-6融合質(zhì)粒(VPIL-6C)構(gòu)建成功。將VPIL6-CpG質(zhì)粒用殼聚糖納米顆粒包裹后，用該納米顆粒單獨(dú)或與巴氏桿菌疫苗、鏈球菌疫苗、豬瘟弱毒苗聯(lián)合免疫21日齡的昆明鼠，分別在免疫后的第0，7，14，21，28，35和42日從小鼠的尾

3、部靜脈取血，然后通過ELISA法檢測其IgG、IgM和IgA、特異性抗體、IL-2、IL-4和IL-6，以及免疫細(xì)胞的數(shù)量變化.　　為進(jìn)一步探討VPIL-6C對豬免疫效應(yīng)的影響，我們將殼聚糖納米顆粒包裹的VPIL-6C聯(lián)合豬瘟、藍(lán)耳病疫苗免疫豬，全面檢測了豬的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平，以及特異性抗體應(yīng)答的情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與對照豬相比，VPIL-6C免疫豬的免疫球蛋白含量、豬瘟和藍(lán)耳病特異性抗體、IL2、IL4和IL6水平以及免疫細(xì)胞數(shù)均