有機(jī)磷農(nóng)藥酶法降解的機(jī)制研究.pdf

1、隨著世界人口的快速成長(zhǎng)，對(duì)于糧食需求也急速的增加。為了解決人類糧食需求的問(wèn)題，需更多的土地來(lái)種植作物以獲得更好的收益，而農(nóng)藥的使用也能有效提高作物的產(chǎn)量。有機(jī)磷是磷酸化合物的酯化衍生物，屬于神經(jīng)性毒物，主要作為農(nóng)業(yè)殺蟲劑使用。不少研究得知有機(jī)磷農(nóng)藥是會(huì)經(jīng)由皮膚及呼吸道對(duì)人體產(chǎn)生間接、直接性障蔽效應(yīng)。所以，盡早發(fā)現(xiàn)人體暴露于有機(jī)磷農(nóng)藥的情形，對(duì)于高暴露的族群之防治，是一科學(xué)上需要的研究主題。人體暴露評(píng)估：根據(jù)文獻(xiàn)記載，日照、溫度、土壤酸堿

2、度等都對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥都有著十分大的影響，很容易造成其失效。在人體中，有機(jī)磷農(nóng)藥也會(huì)因?yàn)橐阴Ｄ憠A酵素的作用下，將農(nóng)藥本體代謝成期代謝產(chǎn)物。由于評(píng)估人體暴露情形不外乎采集血樣或是尿液樣品，考量采樣的容易程度及采樣量。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴實(shí)驗(yàn)菌株E.coliBL21(DE3)/pET30a-mpd的最佳生長(zhǎng)條件；⑵實(shí)驗(yàn)菌株的產(chǎn)酶情況與最佳條件；⑶實(shí)驗(yàn)菌株的產(chǎn)酶特性。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)本文確定了E.coliBL21(DE3)/pET30a

3、-mpd菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)酶最佳培養(yǎng)基為：KH2PO40.7g/L，K2HPO40.3g/L，MgSO40.2g/L，酵母粉1g/L，葡萄糖1g/L，蒸餾水1L，pH7.1；；最佳發(fā)酵你和培養(yǎng)條件為：種子液培養(yǎng)溫度為32℃，發(fā)酵溫度為37℃；裝液量最優(yōu)為100mL；接種量5％為最好，發(fā)酵4h時(shí)添加乳糖進(jìn)行誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)對(duì)甲基硫磷降解酶活性最大，并且乳糖的最佳誘導(dǎo)濃度為15mmol/L。經(jīng)過(guò)對(duì)酶的純化，研究了酶的性質(zhì)。正常測(cè)酶活反應(yīng)體系中，35℃條

4、件下的有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶在pH8.1的50 mmol/L Tris-HCl緩沖液中進(jìn)行反應(yīng)，這種酶降解速率是與酶量相關(guān)的，酶量越大其反應(yīng)速率越快。因此有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶是有效的，其效果也是非常大的。1 mmol/L Tween-20和Tween-80都有抑制酶活性的表現(xiàn)。而EDTA在低于1 mmol/L濃度時(shí)，對(duì)酶活性幾乎沒(méi)有影響；但當(dāng)濃度大于1 mmol/L時(shí)，則會(huì)抑制酶活性，而且隨有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶濃度的增加抑制作用變得越強(qiáng)。低濃度的乙醇