河南省鄭汴兩市卡耶塔環(huán)孢子蟲病流行病學(xué)調(diào)查及分子特征初步研究.pdf

1、環(huán)孢子蟲是一種新近發(fā)現(xiàn)的腸道寄生蟲，分類上屬于頂復(fù)門、孢子蟲綱、球蟲亞綱、真球蟲目、艾美耳科、環(huán)孢子蟲屬，具有廣泛的宿主類型，在世界范圍內(nèi)傳播。環(huán)孢子蟲主要感染宿主小腸的上皮細(xì)胞，特別是空腸。環(huán)孢子蟲可引起宿主持續(xù)性腹瀉、腹痛性痙攣、食欲減退、體重減輕及其它胃腸炎等癥狀。環(huán)孢子蟲主要引起宿主自限性腹瀉，但對于免疫抑制者或免疫功能缺陷者則可引起持續(xù)性腹瀉甚至導(dǎo)致死亡。據(jù)美國疾病預(yù)防控制中心(USCDC)估計，世界范圍內(nèi)每年將會有16264

2、個環(huán)孢子蟲感染病例，實際感染人數(shù)可能是其38倍之多。近年來，環(huán)孢子蟲病受到越來越多研究人員的廣泛關(guān)注和重視。2007年6月到2008年11月我們用福爾馬林乙酸乙酯方法、改良抗酸染色法和飽和蔗糖溶液漂浮法對河南省鄭州和開封兩地區(qū)4家醫(yī)院的住院病人環(huán)孢子蟲感染情況進(jìn)行調(diào)查，共發(fā)現(xiàn)57個環(huán)孢子蟲病例。孢子化試驗發(fā)現(xiàn)，每個成熟卵囊含有兩個孢子囊，每個孢子囊含有兩個子孢子，最適宜的孢子化條件是30℃左右。用PCR方法對18Sr RNA基因和ITS

3、-1基因擴(kuò)增，測序結(jié)果用系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育分析后發(fā)現(xiàn)他們應(yīng)屬于卡耶塔環(huán)孢子蟲。
　　 1.為了解河南省部分地區(qū)環(huán)孢子蟲形態(tài)學(xué)特征、流行情況和種類，我們在2007年6月至2008年11月間用福爾馬林乙酸乙酯方法、飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法對鄭州和開封兩地區(qū)4家醫(yī)院住院病人環(huán)孢子蟲病的流行情況進(jìn)行了調(diào)查。發(fā)現(xiàn)57個人源環(huán)孢子蟲陽性樣品，人源環(huán)孢子蟲卵囊在飽和蔗糖溶液中呈球形，卵囊內(nèi)充滿折光較強(qiáng)顆粒集聚而成的小球體，呈桑椹胚狀，顆粒

4、顯淡綠色，顆粒之間以及顆粒和卵囊壁間的空隙折射顯玫瑰紅色。測量50個環(huán)孢子蟲卵囊，大小約為7.5μm×7.5μm。經(jīng)改良抗酸染色后，背景為藍(lán)色或藍(lán)綠色，卵囊著色變化較大，呈淡紅色、深紅色或不著色。
　　 2.我們共調(diào)查9150名住院病人，總感染率為0.62％(57/9150)。年齡分布從剛出生幾天到100歲高齡，結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)其中以7～17歲這個年齡段的人感染率最高，其次是18～28歲、29～44歲、0～6歲、45～59歲和60～

5、74歲，75歲以上感染率相對較低。從性別上看，男性的感染率為0.68％(37/5454)，女性的感染率為0.54％(20/3696)。在季節(jié)性來看，7、8月份全年氣溫最高降雨量最大的季節(jié)里感染率最高，其它月份的感染率較低。從兩個地區(qū)來看，開封地區(qū)感染率為0.79％(48/6093)，鄭州地區(qū)感染率為0.29％(9/3057)，開封地區(qū)感染率要明顯高于鄭州地區(qū)。
　　 3.我們對57個環(huán)孢子蟲陽性樣品的18S rRNA基因和ITS

6、-1基因擴(kuò)增，巢式PCR擴(kuò)增Cyclospora18S rRNA基因500bp長度序列，擴(kuò)增出35份樣品；用種特異性引物擴(kuò)增C.cayetanensis ITS-1基因500bp長度序列，擴(kuò)增出7份樣品。
　　 4.為從種系發(fā)育關(guān)系確定河南地區(qū)人源環(huán)孢子蟲分離株的種類，對擴(kuò)增出的35個環(huán)孢子蟲樣品的18S rRNA基因和7個環(huán)孢子蟲樣品的 ITS-1基因進(jìn)行測序，測序后的序列用 Blast和 Fasta在 NCBI、EMBL和

7、DDBJ三大核酸序列數(shù)據(jù)庫搜索同源序列，然后利用 Clustal X1.81、Phylip3.64和 DNAstar4.0等生物學(xué)軟件對序列進(jìn)行比對、構(gòu)建分子進(jìn)化樹以及同源性分析。根據(jù)在18S rRNA基因位點(diǎn)種系進(jìn)化關(guān)系分析，表明35個人源環(huán)孢子蟲樣品與 C. cayetanensis在兩個堿基位置上存在堿基差異。與其他3種非人靈長類環(huán)孢子蟲比較，河南流行株與 C.cayetanensis親緣關(guān)系最近。根據(jù)在 ITS-1基因位點(diǎn)種系進(jìn)